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一种猪金属硫蛋白的检测方法

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成果类型:
专利
发明/设计人:
张彬;吴力专;李丽立
申请/专利权人:
湖南农业大学
专利类型:
发明专利
语种:
中文
申请时间:
2004-12-3
申请/专利号:
CN200410061265.9
公开时间:
2005-5-25
公开号:
CN1619309
主申请人地址:
410128湖南省长沙市芙蓉区
申请地区:
湖南
代理人:
黄瑞棠
专利代理机构:
武汉宇晨专利事务所
机构署名:
本校为第一完成单位
主权项:
1、一种猪金属硫蛋白的检测方法,包括固相抗原间接竞争型酶联免疫吸附法;其特征在于用达到电泳纯的小鼠抗猪金属硫蛋白IgG作一抗,用山羊抗小鼠酶标抗体作二抗,采用固相抗原间接竞争型酶联免疫吸附法,测定猪金属硫蛋白的含量;其步骤如下:①包被——加含标准品金属硫蛋白MT的包被液即碳酸钠缓冲液90-110μl/孔,3-5℃包被过夜;取出,每孔加洗涤液即含0.050%tween-20的磷酸缓冲液240-260μl,静置2.5-3.5min,洗涤3-5次;②封闭——每孔加封闭液即含10.00%新生牛血清的磷酸缓冲液180-220μl,36.9-37.5℃封闭1.5-2.5hr,以转速40-60转/分振荡,并以不振荡出孔内溶液为限,取出,每孔加洗涤液240-260μl,静置2.5-3.5min,洗涤3-5次;③加一抗即抗猪金属硫蛋白IgG与样品——将等量的含抗体和标准品或待测品的稀释液即含0.050%tween-20和0.150%牛血清白蛋白的磷酸缓冲液混合均匀后,加混合液90-110μl/孔,同一样品重复2-3孔,36.9-37.5℃反应2.5-3.5hr,以转速40-60转/分振荡,并以不振荡出孔内溶液为限,取出,每孔加洗涤液240-260μl,静置2.5-3.5min,洗涤3-5次;④加酶标二抗——加稀释好的辣根过氧化酶标记的山羊抗小鼠二抗90-110μl/孔,35-39℃反应1.8-2.2hr,以转速40-60转/分振荡,并以不振荡出孔内溶液为限,取出,每孔加洗涤液240-260μl,静置2.5-3.5min,洗涤3-5次;⑤加底物——加TMB底物90-110μl/孔,36.9-37.5℃反应18-22min,以转速40-60转/分振荡,并以不振荡出孔内溶液为限;⑥加反应终止液——加H2SO4溶液45-55μl/孔;⑦在酶标仪上450nm波长读数。
摘要:
本发明公开了一种猪金属硫蛋白的检测方法,涉及动物金属硫蛋白的检测方法,具体地说,涉及一种猪金属硫蛋白定性、定量检测的方法。本发明是用达到电泳纯的小鼠抗猪金属硫蛋白IgG作一抗,用山羊抗小鼠酶标抗体作二抗,采用固相抗原间接竞争型酶联免疫吸附法,测定猪金属硫蛋白的含量;其步骤有:①包被;②封闭;③加一抗与样品;④加酶标二抗;⑤加底物;⑥加终止液;⑦在酶标仪上450nm波长读数。本发明可以定性、定量检测在正常生理状态下猪体内各组织器官的金属硫蛋白;方便、快捷,灵敏度高,稳定性和重复性好;成本较低,取材容易,实用性强。

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