酵母前体饲喂验证植物次生代谢产物功能基因方法学初探

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成果类型：

期刊论文

作者：

刘金凤;黄鹏;卿志星;刘秀斌;柳亦松;...

通讯作者：

Zeng, J.-G.

作者机构：

Horticulture & Landscape College of Hunan Agricultural University, Changsha, 410128, China

National and Local Union Engineering Research Center for the Veterinary Herbal Medicine Resources and Initiative, Hunan Agricultural University, Changsha, 410128, China

Veterinary Faculty of Hunan Agricultural University, Changsha, 410128, China

[卿志星] Pharmacy College of Hunan University of Chinese Medicine, Changsha, 410128, China

[刘秀斌; 刘金凤; 唐其; 黄鹏] Horticulture & Landscape College of Hunan Agricultural University, Changsha, 410128, China, National and Local Union Engineering Research Center for the Veterinary Herbal Medicine Resources and Initiative, Hunan Agricultural University, Changsha, 410128, China

通讯机构：

[Zeng, J.-G.] H

Horticulture & Landscape College of Hunan Agricultural University, Changsha, China

语种：

中文

关键词：

次生代谢;基因功能验证;酵母前体饲喂;PsP6H基因;PsCPR基因

关键词(英文)：

Gene functional verification;PsCPR genes;PsP6H genes;Saccharomyces cerevisiae cell feeding;Secondary metabolism

期刊：

中草药

ISSN：

0253-2670

年：

2017

卷：

期：

页码：

559-566

DOI：

10.7501/j.issn.0253-2670.2017.03.022

基金类别：

国家重点实验室培育基地开放项目（15KFXM15）；园艺学优势特色重点学科开放基金项目（2015YYX001）；湖南农业大学***基金（13YJ09）；湖南省研究生科研创新项目（CX2014B302）；

机构署名：

本校为第一且通讯机构

院系归属：

园艺园林学院

动物医学院

摘要：

目的筛选效率最高的酵母前体饲喂方式,为在酵母中进行基因功能验证提供方法学指导。方法首先构建含PsP6H基因和PsCPR基因重组酵母工程菌,然后用4种不同的方法进行前体饲喂,最后质谱检测下游产物二氢血根碱来确定最优方案。结果最优的前体饲喂方法是将酵母工程菌经过半乳糖诱导31 h后在pH 8.0的Tris EDTA溶液中孵育24 h。结论不同的前体饲喂方式对酵母工程菌下游产物产生不同影响,经优化后的酵母前体饲喂方法较稳定,重复性好。

摘要(英文)：

Objective: To screen the most efficient cell feeding way and provide guidance for functional verification of genes in Saccharomyces cerevisiae. Methods: Firstly, the recombinant industrial S. cerevisiae strains containing PsCPR and PsP6H genes were constructed. Then four different cell feeding methods were used. At the end, the downstream product dihydrosanguinarine was detected via UPLC Q-TOF MS/MS. Results: The best method of cell feeding was that the recombinant industrial strain induced by galactose for 31 h and then incubated in the TE sol...

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