期刊论文

中文

湖南农业大学学报(自然科学版)

1007-1032

2012

38

4

398-403

10.3742/SP.J.1238.2012.00398

湖南省自然科学基金项目（11JJ3040）； 湖南省大学生科技创新研究项目（DFCXS201003）；

本校为第一机构

以从皱边石杉中分离纯化出的99株内生真菌DNA为材料,优选出10条ISSR引物(UBC842、UBC848、UBC850、UBC856、UBC861、UBC864、UBC868、UBC873、UBC880、UBC887)的最适退火温度,并对其进行ISSR–PCR反应体系单因素试验及正交试验优化,建立皱边石杉内生真菌ISSR–PCR的优化反应体系,即25μL反应体系中,10×PCR Buffer(Mg~(2+)浓度为2.0 mmol/L)2.5μL,dNTPs(10 mmol/L)0.6μL,引物(10 pmol/μL)2.0μL,Taq E(1 U/μL)1.5μL,DNA模板(10 ng/μL)3μL,无菌ddH_2O 15.4μL。以UBC873引物对99株内生真菌基因组DNA进行PCR扩增,初步获知皱边石杉内生真菌资源的遗传多样性非常丰富。

DNAs were extracted from 99 endophytic fungi isolated from Huperzia crispata and the best annealing temperatures of 10 primers （UBC842, UBC848, UBC850, UBC856, UBC861, UBC864, UBC868, UBC873, UBC880 and UBC887） were determined for optimization of ISSR-PCR amplification of endophytic fungi from Huperzia crispate through single factor test and orthogonal design. The result showed that the optimal ISSR-PCR reaction volume was 25 p.L, containing 2.5 μL of 10×PCR Buffer （2.0 mmol/L Mg^2＋）, 0.6 p.L of dNTPs （10 mmol/L）, 2.0 μL of primer （1...