期刊论文

Nano High Performance Liquid Chromatography Coupling with Time-of-flight Mass Spectrometer for Identification of Membrane Proteins in HaCaT Cells

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安徽农业科学

0517-6611

2013

28

11293-11294+11335

10.13989/j.cnki.0517-6611.2013.28.003

21102094:国家自然科学基金 A2012577:广东省医学科研基金 ZDSY2-0120615085804889:深圳市重点实验室提升计划 JCYJ20130329161137543:深圳市科创委基础研究项目

本校为第一机构

[目的]探讨通过纳升液相色谱-飞行时间质谱检测人永生化表皮细胞的膜蛋白质的方法。[方法]对人永生化表皮细胞进行贴壁培养，然后对处于对数生长期细胞的膜蛋白进行提取、富集和酶解，用nano—HPLC—TOF／TOF—MS对蛋白质进行鉴定，最后用生物信息学技术对鉴定蛋白进行分析和归类。[结果]在鉴定的15个蛋白中，与细胞膜相关的蛋白有9个，占比例的60％。生物信息学分析表明，这些蛋白在分子功能上主要涉及催化，结构分子活性和结合；在生物学进程上，这些蛋白主要归类为代谢，细胞成分形成和细胞生物进程等。[结论]纳升色谱-飞行时间质谱是鉴定膜蛋白的有效方法。

[ Objective] To apply the nano high performance liquid chromatography coupling with time-of-flight mass spectrometer （nano- HPLC-TOF-MS） to detect the membrane proteins in HaCaT cells. [ Methods] HaCaT cells were collected after the cell confluence reached up to 70% -80% by membrane extraction kit. Then, the enzymatic hydrolysis was conducted on the membrane protein comPlexes, and followed by separation and detection with nano-HPLC-TOF-MS. The identified proteins were classified by bioinformatics analysis. [ Result] There are 9 membrane prote...