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一种高速逆流色谱结合制备液相色谱从钩吻生物碱中分离钩吻生物碱单体的方法

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成果类型:
专利
发明/设计人:
刘兆颖;陆英;唐其
申请/专利权人:
湖南农业大学
专利类型:
发明专利
语种:
中文
申请时间:
2020-05-13
申请/专利号:
CN202010399671.5
公开时间:
2020-08-21
公开号:
CN111560024A
主申请人地址:
410128 湖南省长沙市芙蓉区农大路1号
申请地区:
湖南
机构署名:
本校为第一完成单位
主权项:
1.一种高速逆流色谱结合制备液相色谱从钩吻生物碱中分离钩吻生物碱单体的方法,其特征在于:将钩吻提取物采用高效液相色谱确定目标钩吻生物碱,依次通过高速逆流色谱法初步分离和制备液相色谱法二次分离,分别收集各目标钩吻生物碱单体组分。 2.根据权利要求1所述的一种高速逆流色谱结合制备液相色谱从钩吻生物碱中分离钩吻生物碱单体的方法,其特征在于: 所述高效液相色谱法的条件: 色谱柱:安捷伦ZORBAX SB-C18色谱柱; 流动相:0.1~0.3wt%磷酸-0.4~0.6wt%三乙胺混合水溶液和乙腈; 采用梯度洗脱程序:0~65min,乙腈体积百分比由12%匀速升高至47%; 高效液相色谱参数:流速为0.8~1.2mL/min;柱温为28~32℃;进样量为15~25μL。 3.根据权利要求1所述的一种高速逆流色谱结合制备液相色谱从钩吻生物碱中分离钩吻生物碱单体的方法,其特征在于:所述高速逆流色谱法的条件: 采用的两相体系由0.5~1.5wt%三乙胺水溶液、正己烷、乙酸乙酯、乙醇按体积比3~5:1~3:2~4:1~3组成; 高速逆流色谱仪参数:转速为800~900rpm/min,柱温箱为20~30℃,流速为1.5~2.5mL/min。 4.根据权利要求3所述的一种高速逆流色谱结合制备液相色谱从钩吻生物碱中分离钩吻生物碱单体的方法,其特征在于:在高速逆流色谱进行初步分离过程中,依据高速逆流色谱图谱收集各目标钩吻生物碱单体组分:流分I:80~100min;流分II:128~143min;流分III:187~230min;流分IV:249~298min;高速逆流色谱图谱采集至400min时,管柱内溶液上下相分离,上相为流分V,下相为流分VI。 5.根据权利要求1或4所述的一种高速逆流色谱结合制备液相色谱从钩吻生物碱中分离钩吻生物碱单体的方法,其特征在于: 所述制备液相色谱法的条件: 色谱柱:UnitaryC18反相色谱柱; 采用的流动相体系由0.4~0.6wt%三乙胺-0.1~0.3wt%冰乙酸混合溶液和乙腈组成; 采用梯度洗脱程序,依据制备液相色谱图谱收集各目标钩吻生物碱单体组分: 流分I:0~50min:乙腈体积百分比由13%匀速升高至50%,依次收集得到羟基钩吻素己和常绿钩吻碱; 流分II:0~25min:乙腈体积百分比由22%匀速升高至30%;25~35min:乙腈体积百分比由30%匀速升高至60%;35~40min:乙腈体积百分比保持在60%,依次收集得到常绿钩吻碱和羟基胡蔓藤碱乙; 流分III:0~10min:乙腈体积百分比由30%匀速升高至40%;10~30min:乙腈体积百分比由40%匀速升高至50%;30~35min:乙腈体积百分比保持在50%,收集得到钩吻素子; 流分IV:0~40min:乙腈体积百分比由25%匀速升高至60%;40~45min:乙腈体积比保持在60%,收集得到钩吻素甲; 流分V:0~25min:乙腈体积百分比由30%匀速升高至45%;25~35min:乙腈体积百分比保持在45%;依次收集得到钩吻绿碱及11-羟基胡蔓藤碱乙; 流分VI:0~40min:乙腈体积百分比由30%匀速升高至50%;40~45min:乙腈体积百分比保持在50%,依次收集得到钩吻绿碱和胡蔓藤碱乙; 制备液相色谱参数:流速为4~8mL/min。
摘要:
本发明公开了一种高速逆流色谱结合制备液相色谱从钩吻生物碱中分离钩吻生物碱单体的方法,该方法是将钩吻提取物采用高效液相色谱确定目标钩吻生物碱单体组分后,依次通过高速逆流色谱法初步分离和制备液相色谱法二次分离,分别收集各目标钩吻生物碱单体组分。该方法采用多个色谱仪联用分离钩吻单体,具有制备量大,周期短,纯度高等优点,可同时分离获得8个钩吻生物碱单体,具备可控性和自动化生产性,且具有广泛的应用前景。

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