CRISPR/Cas9系统是一种广泛应用于细菌、酵母、动物和植物中的基因组定点编辑技术.本研究利用该系统对番茄中控制番茄红素环化酶合成的4个内源基因(LcyB1、LcyB2、CycB、LcyE)进行了定点敲除.为研究靶位点的设计和选择对该系统介导的番茄内源基因敲除效率的影响,本文分析了不同单向导RNA(Single-guide RNA,sg RNA)结合番茄红素环化酶靶基因DNA序列后对突变效率的影响.结果表明sgRNA与靶基因错配会导致敲除的效率降低,而本研究构建的U6启动子驱动的sgRNA表达载体,为提高转录效率,限定sgRNA的5'末端为GG.通过进一步研究表明,该系统能够同时敲除番茄中控制番茄红素环化酶合成的4个内源基因,获得...
