专利

发明专利

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2014-5-30

CN201410238677.9

2014-08-27

CN104007053A

410001 湖南省长沙市芙蓉区人民东路湖南农业大学11教北4楼

王文君

北京路浩知识产权代理有限公司 11002

本校为第一完成单位

一种检测拟南芥叶片细胞数目的方法,其特征在于,包括以下步骤：1)植物叶片的酶解：取1片拟南芥叶片,剪切成长0.5?1.0mm、宽0.1?0.2mm的小块,然后加入叶片酶解液0.5?1mL,于20?22℃,30?40rpm黑暗酶解10?12小时,至叶片酶解完全；2)细胞裂解与细胞核的收集：将酶解完全的叶片酶解液过300?400目筛,然后以1400g?1500g离心10?12min,弃上清,加入溶液I溶解沉淀,将剪去顶端的枪头安装于移液枪上吹吸沉淀数次,直至沉淀完全溶解；然后将溶液于1400g?1500g离心10?12min,弃上清,向沉淀中加入预冷的细胞裂解缓冲液,再次将剪去顶端的枪头安装于移液枪上吹吸沉淀数次,直至混匀,冰浴5?10min后,4℃1400g?1500g离心10?12min,弃上清,所得沉淀再次用预冷的细胞裂解缓冲液溶解,并重复上述步骤1?3次,直至沉淀呈灰黑色；3)细胞核的......

本发明提供一种检测拟南芥叶片细胞数目的方法,包括植物叶片的酶解、细胞裂解与细胞核的收集、细胞核的染色与计数等步骤。通过流式细胞仪检测统计细胞核数目,从而确定拟南芥叶片细胞数目。与采用细胞计数板观察统计植物叶片细胞数目相比,本方法能计数整个植物叶片的细胞数目,具有操作方便,客观、精确的优势。