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pET-28a-SUMO-凝血因子II蛋白抗原及其多克隆抗体的制备方法

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成果类型:
专利
发明/设计人:
刘巧林;许宝红;肖调义;陈蕾;吕丽刚;...
申请/专利权人:
湖南农业大学
专利类型:
发明专利
语种:
中文
申请时间:
2019-07-15
申请/专利号:
CN201910635948.7
公开时间:
2019-10-18
公开号:
CN110343715A
主申请人地址:
410128 湖南省长沙市芙蓉区农大路1号
申请地区:
湖南
机构署名:
本校为第一完成单位
主权项:
1.一种pET-28a-SUMO-凝血因子II蛋白抗原,其序列如SEQ ID NO.4所示。 2.一种多克隆抗体,其特征在于,该抗体是以SEQ ID NO.4所示的pET-28a-SUMO-凝血因子II蛋白抗原免疫实验级日本大耳白兔后得到。 3.制备权利要求2所述的多克隆抗体的方法,其特征在于,该方法步骤如下: (1)构建如SEQ ID NO.3所示的草鱼凝血因子II基因片段的重组表达载体,将该重组表达载体导入表达大肠杆菌中表达,纯化后获得pET-28a-SUMO-凝血因子II蛋白抗原; (2)利用该pET-28a-SUMO-凝血因子II蛋白抗原免疫实验级日本大耳白兔,采血,收集抗血清,将抗血清纯化,浓缩,即可。 4.如权利要求3所述的多克隆抗体的制备方法,其特征在于,所述步骤(1)中构建过程中扩增草鱼凝血因子II基因片段所使用的引物对序列为SEQ ID NO.1所示的pET-28a-SUMO-FII-F和SEQ ID NO.2所示的pET-28a-SUMO-FII-R。 5.如权利要求3所述的多克隆抗体的制备方法,其特征在于,所述利用该pET-28a-SUMO-凝血因子II蛋白抗原免疫实验级日本大耳白兔的过程如下:第一次免疫采用的免疫剂量为0.3 mg,使用完全弗氏佐剂;12天后进行第二次免疫,使用草鱼凝血因子II抗原的剂量为0.15 mg,使用不完全弗氏佐剂;第一次免疫26天后进行第三次免疫,使用草鱼凝血因子II抗原的剂量为0.15 mg,使用不完全弗氏佐剂;第一次免疫40天后进行第四次免疫,使用草鱼凝血因子II抗原的剂量为0.15 mg,使用不完全弗氏佐剂。 6.如权利要求3所述的一种草鱼凝血因子II多克隆抗体的制备方法,其特征在于,所述采血时间为第一次免疫后52天。 7.如权利要求3所述的一种草鱼凝血因子II多克隆抗体的制备方法,其特征在于,所述将抗血清纯化是用pET-28a-SUMO-凝血因子II蛋白抗原亲和纯化。
摘要:
一种pET‑28a‑SUMO‑凝血因子II蛋白抗原及多克隆抗体的制备方法,是利用草鱼凝血因子II特异性引物通过PCR扩增技术合成草鱼凝血因子II基因序列,再克隆到pET‑28a‑SUMO表达载体后导入到大肠杆菌(E.coli Rosetta)中表达,纯化,得到pET‑28a‑SUMO‑凝血因子II蛋白抗原,将该抗原多次免疫实验级日本大耳白兔,采血,收集抗血清,用pET‑28a‑SUMO‑凝血因子II蛋白作抗原亲合纯化,得到浓缩的草鱼凝血因子II多克隆抗体。通过本方法能得到满足后续实验需求的浓缩草鱼凝血因子II多克隆抗体,为后续检测草鱼凝血因子II的表达提供重要实验试剂。

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