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黑金红头鼠线粒体全基因组序列的扩增引物和扩增方法

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成果类型:
专利
发明/设计人:
刘巧林;李伟;肖调义;许宝红
申请/专利权人:
湖南农业大学
专利类型:
发明专利
语种:
中文
申请时间:
2019-03-18
申请/专利号:
CN201910201612.X
公开时间:
2019-06-11
公开号:
CN109868272A
主申请人地址:
410128 湖南省长沙市芙蓉区东湖农大路1号
申请地区:
湖南
机构署名:
本校为第一完成单位
主权项:
1.一种黑金红头鼠线粒体基因组全序列的扩增引物,其特征在于,该扩增引物包括22对引物对: 第1对引物对的上游引物F1为:5’–CAGGCATCAGGCACAATCAT–3’,下游引物R1为:5’–CCGGTACACTTACCATGTTACGAC–3’; 第2对引物对的上游引物F2为:5’–GCACGAAGTGGGAAGAAATG–3’,下游引物R2为:5’–GGCCCACTGAAGCGGTAATC–3’; 第3对引物对的上游引物F3为:5’–GCTGGTTGCCTAAGAAGTGG–3’,下游引物R3为:5’–TGGTCGCCCCAACCGAAGAT–3’; 第4对引物对的上游引物F4为:5’–TGATCTGCCCGTGCAGAAGC–3’,下游引物R4为:5’–TGGGTGTGGCGAGAAATAGG–3’; 第5对引物对的上游引物F5为:5’–CGTAGTAGGCCCATTCGGAC–3’,下游引物R5为:5’–TTGGCATTCAGGCACAGCTC–3’; 第6对引物对的上游引物F6为:5’–CCTCGATTCCGCTACGACCA–3’,下游引物R6为:5’–CGAGGTGTGCAATTGATGAG–3’; 第7对引物对的上游引物F7为:5’–AGCCCCATTCGCACTAATCG–3’,下游引物R7为:5’–GCGGGGAAAGTAGATGAATG–3’; 第8对引物对的上游引物F8为:5’–TGAATGCAACCCAGACACTT–3’,下游引物R8为:5’–TAATTCCAGCGGCTAGGACT–3’; 第9对引物对的上游引物F9为:5’–CTCCATCTCGCTGGTGTTTC–3’,下游引物R9为:5’–TAGCGGCGAAGGCTTCTCAT–3’; 第10对引物对的上游引物F10为:5’–CCTTCTTCCCCCAACACTTC–3’,下游引物R10为:5’–TCGGATCGGGGATTCCATTG–3’; 第11对引物对的上游引物F11为:5’–TTAAAGCCATAGGCCATCAA–3’,下游引物R11为:5’–TGGTACTGCAAGGCCTATGT–3’; 第12对引物对的上游引物F12为:5’–CACCCCACTAAACAAGAGCG–3’,下游引物R12为:5’–TCGGTGGCCTTCCATAATGC–3’; 第13对引物对的上游引物F13为:5’–TGGCCCCAACACCAGAACTA–3’,下游引物R13为:5’–TTCCTGAGCCGAAATCAGAG–3’; 第14对引物对的上游引物F14为:5’–CTCCCCGAACCCACCATTAC–3’,下游引物R14为:5’–TTGGTTGCCTCATCGCGTAA–3’; 第15对引物对的上游引物F15为:5’–TCAGCCGCCAACGAACCTAT–3’,下游引物R15为:5’–GTGCCTCGTTGGGTTTTTAG–3’; 第16对引物对的上游引物F16为:5’–GCCAACCTAGCGAATCTAGC–3’,下游引物R16为:5’–GCATCTGCTCGTCCATATCA–3’; 第17对引物对的上游引物F17为:5’–CGCAGACCCCTACATAAACC–3’,下游引物R17为:5’–ATACTGCTGCGAATGAGGTG–3’; 第18对引物对的上游引物F18为:5’–TTGGAAGCCTCGCATTAACC–3’,下游引物R18为:5’–AGCGGTGTGATGGTATTGTG–3’; 第19对引物对的上游引物F19为:5’–CGCACAAATCACCAACACTC–3’,下游引物R19为:5’–GATTACTGTGGCGCCTCAGA–3’; 第20对引物对的上游引物F20为:5’–CCAACGGAGCTTCCTTCTTC–3’,下游引物R20为:5’–TTCTAGTCATCCGGTTGCAG–3’; 第21对引物对的上游引物F21为:5’–ACATGAATCGGCGGAATACC–3’,下游引物R21为:5’–AAGAATGCTCGGCATGGTGG–3’; 第22对引物对的上游引物F22为:5’–GGCATCTGGTTCCTATCTGA–3’,下游引物R22为:5’–GTGGCTGGCACGAATTTTAC–3’。 2.根据权利要求1所述的黑金红头鼠线粒体基因组全序列的扩增引物,其特征在于,所述扩增引物是根据GenBank数据库中收录的黑躯兵鲶(Corydoras rabauti)线粒体全基因组序列设计得到。 3.一种对黑金红头鼠线粒体基因组全序列扩增的方法,其特征在于,该方法是以提取的黑金红头鼠肌肉组织总DNA为模板,分别用权利要求1所述的22对引物对进行PCR扩增,扩增产物经1.0%琼脂糖凝胶电泳检测后进行测序及序列拼接。 4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述PCR的反应体系为50μL,其中:1μL DNA模板、1μL 10μM上游引物、1μL 10μM下游引物、1μL 10mM dNTP、5μL 10×不含Mg2+的PCRBuffer、5μL 25mM MgCl2、0.5μL 5U/μL Taq酶及35.5μL无核酸酶水。 5.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述PCR扩增条件为:95℃预变性3min,然后94℃变性45s,56℃退火1min,72℃延伸90s,共35个循环,最后72℃延伸8min。 6.根据权利要求3所述方法获得的黑金红头鼠线粒体基因组全序列,其特征在于,该线粒体基因组长度为16667bp,全基因组序列包含2个核糖体RNA基因,13个不含内含子的蛋白编码基因,22个转运RNA基因和2个非编码区(控制区和轻链复制起始区)。
摘要:
一种黑金红头鼠线粒体基因组全序列扩增引物和扩增方法,是根据GenBank数据库中收录的黑躯兵鲶(Corydoras rabauti)线粒体全基因组序列设计22对扩增引物,以提取的黑金红头鼠基因组总DNA为模板,分别用该些扩增引物进行PCR扩增,扩增产物电泳后进行测序及序列拼接,获得黑金红头鼠线粒体基因组全序列,为观赏鱼类品种鉴定、资源保护提供了分子生物学信息。

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