版权说明 操作指南
首页 > 成果 > 详情

一种鉴定辣椒新型单簇生花序的Indel分子标记,引物及应用

认领
导出
反馈
分享
QQ微信 微博
成果类型:
专利
发明/设计人:
欧立军;邹学校;吕俊恒;陈文超;于会洋;...
申请/专利权人:
湖南农业大学
专利类型:
发明专利
语种:
中文
申请时间:
2019-09-24
申请/专利号:
CN201910904588.6
公开时间:
2019-11-22
公开号:
CN110484648A
主申请人地址:
410128 湖南省长沙市芙蓉区农大路1号
申请地区:
湖南
机构署名:
本校为第一完成单位
主权项:
1.一种鉴定辣椒新型单簇生花序的Indel分子标记,是从辣椒11号染色体197763834处开始的一段43bp的插入/缺失,其序列如下:GATTTGTAGAATATTTTCTTGACTTTACTCTTCCGCAGATGCC。 2.一种权利要求1所述的Indel分子标记的引物,其特征在于,是根据43bp插入/缺失片段的上下游设计的引物。 3.根据权利要求2所述的引物,其特征在于: 正向引物CaDH-F:CGGGAGGCTATGTGACATTC 反向引物CaDH-R:TCTACGTCGTCCACGTTCAA。 4.权利要求1所述的Indel分子标记和权利要求2或3所述的引物在辣椒新型簇生花序和单生花序类型鉴定及分子辅助育种中的应用。 5.根据权利要求4所述的应用,其特征在于,具体包括如下步骤: (1)提取辣椒单株DNA作为模板; (2)加入权利要求2或3所述的引物进行PCR扩增; (3)利用琼脂糖凝胶电泳对PCR产物进行检测,利用凝胶成像系统读取带型; (4)根据步骤(3)所得带型,如果只有243bp特异条带出现时,预测为簇生花序类型单株;如果只有200bp的特异条带出现,或者同时出现243bp与200bp的特异条带,预测为单生花序类型单株。 6.根据权利要求5所述的应用,其特征在于, PCR反应体系:总体积为20μl,具体成分如下:PCR在20μL反应系统中进行,该反应系统由1μl 30ng/μl的基因组DNA,18μl PCR-T3-Mix和10μmol正向和反向引物各0.5μl组成。 7.根据权利要求5或6所述的应用,其特征在于, PCR反应扩增程序为:98℃下预变性3分钟后;在98℃的变性15秒,退火温度为55-60℃,持续10秒,延伸温度为72℃,持续30秒,30个循环;然后在72℃下进行最终延伸3分钟;反应终止。 8.权利要求1所述的鉴定辣椒新型单簇生花序的Indel分子标记的获得方法,其特征在于,方法如下: (1)以辣椒单生花序高代自交系L816与CJ220分别为母本,新型的簇生花序材料CL74为父本,分别构建F2群体CS与SY; (2)将CS与SY两个F2群体单株种植于玻璃温室,进行常规栽培管理;待群体单株进入盛花期后对F2群体单株进行表型鉴定;同时选取CS群体中单生花序与簇生花序的单株各30株构建单生混池与簇生混池,单株用CTAB法分别提取DNA后再进行等量混合,将等量混合的两个混池进行建库测序,测序深度20X; (3)DNA文库的原始数据通过去除接头,低质量和重复的Reads来过滤,然后使用Burrows-Wheeler对齐工具BWA与辣椒参考基因组Zunla-1_V2进行比对;使用GATK软件检测SNP和插入缺失InDel;根据以下标准过滤结果:settings:--filter Expression"QD<4.0||FS>60.0||MQ<40.0",-G_filter"GQ<20",--fasciculate WindowSize 4;InDel通过不同的过滤参数过滤,如下:settings:--filter Expression"QD<4.0||FS>200.0||ReadPosRankSum<-20.0||Inbreeding Coeff<-0.8";使用ANNOVAR基于参考基因组的GFF3文件注释SNP或InDel;SNP指数SNP-index和Δ(SNP-index)值用于鉴定与束状花序相关的候选基因组区域;将两个池中的SNP/InDel指数小于0.3的点过滤掉;基于野生型和突变体库之间的SNP-index的差异确定Δ(SNP-index);使用具有1-Mb窗口大小和10-kb增量的滑动窗口方法作为默认设置来计算位于给定基因组区间中的SNP的Δ(SNP-index)的平均值;为了确定与突变表型相关的候选区域,首先针对具有给定读取深度和99%置信区间的所有SNP位置计算Δ(SNP-index)的统计置信区间;随后检查Δ(SNP-index),并将置信值以上的染色体区域作为候选区域; (4)提取CS群体亲本L816与CL74进行10X重测序,利用L816与CL74之间的变异数据进行标记开发; (5)利用亲本变异数据对BSA获得的候选染色体区域进行标记开发与基因精细定位,利用区间变异数据设计的引物在F2Q群体中检测共分离程度,筛选共分离程度较高的标记。
摘要:
本发明公开了一种鉴定辣椒新型单簇生花序的Indel分子标记、引物及应用。利用4份高度纯合的自交系构建两个F2群体(CS,SY)。利用群体分离分析法(BSA)与连锁定位的方法获得与辣椒簇生花序紧密连锁的染色体区域和候选基因,并进一步根据候选基因附近紧密连锁的变异开发分子标记,利用该标记对CS,SY两个F2群体单株进行基因型鉴定,CS中符合率达到100%,SY中符合率达到94%。本研究结果不仅有助于补充辣椒花序结构类型鉴定的方法及分子辅助育种,且为控制此种新型的辣椒簇生花序基因的图位克隆及解析簇生花序形成的分子机制提供了基础。

反馈

验证码:
看不清楚,换一个
确定
取消

成果认领

标题:
用户 作者 通讯作者
请选择
请选择
确定
取消

提示

该栏目需要登录且有访问权限才可以访问

如果您有访问权限,请直接 登录访问

如果您没有访问权限,请联系管理员申请开通

管理员联系邮箱:yun@hnwdkj.com