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草鱼补体C5基因、用于克隆草鱼补体C5基因的引物及克隆方法

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成果类型:
专利
发明/设计人:
许宝红;刘巧林;肖调义;赵玉蓉
申请/专利权人:
湖南农业大学
专利类型:
发明专利
语种:
中文
申请时间:
2019-06-14
申请/专利号:
CN201910517352.7
公开时间:
2019-09-13
公开号:
CN110229821A
主申请人地址:
410128 湖南省长沙市芙蓉区农大路1号
申请地区:
湖南
机构署名:
本校为第一完成单位
主权项:
1.草鱼补体C5基因,该基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。 2.权利要求1所述的草鱼补体C5基因编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。 3.一种用于克隆草鱼补体C5基因的引物,其中,该引物分别为C5-ORF-F/R、C5-5'-外、C5-3'-外,序列分别如下: C5-ORF-F:AATTCTGCAGTCGACGGTACCATGGCACGTTTATTTTTGTTCTGT, C5-ORF-R:ATGGTGGCGACCGGTGGATCCGCATCACAGCCCGATAATAAGAAATCT; C5-5'-外:GATTACGCCAAGCTTAGCAATTCCATCTCCCCGACTCGTCACT, C5-3'-外:5’-AATGTCAATTGACATTCATGACAGCGT-3’。 4.一种克隆草鱼补体C5基因的方法,其中,该方法步骤如下: (1)从草鱼肝脏中提取总RNA; (2)设计扩增草鱼补体C5基因保守结构域核苷酸片段的引物C5-ORF-F和C5-ORF-R,将提取的草鱼RNA反转录成cDNA第一链,并以合成的cDNA第一链为模板,PCR扩增得cDNA保守结构域核苷酸片段; (3)利用试剂盒合成草鱼补体C5基因的5′-RACE-Ready cDNA和3′-RACE-Ready cDNA; (4)根据步骤(2)扩增得到的cDNA保守结构域片段设计5’-RACE下游内外巢引物和3’-RACE上游内外巢引物,并分别以步骤(3)合成的5′-RACE-Ready cDNA和3′-RACE-ReadycDNA为模板,扩增得到草鱼补体C5基因的cDNA5′端和cDNA3′端片段; (5)将cDNA保守结构域核苷酸片段、cDNA5′端和cDNA3′端片段进行拼接得到草鱼补体C5基因的全长cDNA序列。 5.如权利要求4所述的克隆草鱼补体C5基因的方法,其中,所述引物C5-ORF-F和C5-ORF-R是根据NCBI中草鱼补体C5基因序列设计的。
摘要:
一种草鱼补体C5基因、用于克隆草鱼补体C5基因的引物及克隆方法,其是设计扩增草鱼补体C5基因的保守结构域核苷酸片段的引物,将提取的草鱼RNA反转录成cDNA第一链,以此为模板PCR扩增得cDNA保守结构域核苷酸片段;并根据该保守结构域片段设计5’‑RACE下游内外巢引物和3’‑RACE上游内外巢引物,再分别以5′‑RACE‑Ready cDNA和3′‑RACE‑Ready cDNA为模板,扩增得到草鱼补体C5基因的cDNA 5′端和cDNA 3′端片段;将cDNA保守结构域核苷酸片段、cDNA 5′端和cDNA 3′端片段进行拼接得到草鱼补体C5基因的全长cDNA序列。

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