本发明公开了一种牛肉生物型嫩化剂及其制备方法和应用,其中牛肉生物型嫩化剂由解淀粉芽孢杆菌菌株经活化、发酵培养制备得到;解淀粉芽孢杆菌菌株为解淀粉芽孢杆菌D7(Bacillus amyloliquefaciens),保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏时间为:2016年11月10日,保藏编号为CGMCC No.13250。其制备方法包括以下步骤:将解淀粉芽孢杆菌菌株接种到肉汤培养基中活化得到活化液;将活化液接种到发酵培养基中进行发酵培养得到牛肉生物型嫩化剂。本发明提供的牛肉生物型嫩化剂用于肉类制品的嫩化效果明显、安全、可控。