作者： 卢帅;黎满香;刘珂;颜运秋

作者机构： 湖南农业大学动物医学院 长沙 410128

会议名称： 湖南省第二届研究生创新论坛——农业生产与食品安全分论坛

会议时间： 2009-11-01

会议地点： 长沙

会议论文集名称： 湖南省第二届研究生创新论坛——农业生产与食品安全分论坛论文集

关键词： 抗菌肽;Dermadistinctin基因;串联体;融合表达;抗菌活性检测;重叠延伸法

摘要： 本文根据GenBank中的Dermadistinctin K(DDK)，Dermadistinctin L(DDL)的氨基酸序列，选择大肠杆菌偏好密码子，采用重叠延伸法(SOE)合成了抗菌肽DDK，DDL基因。在DDK，DDL中引入肠激酶裂解位点，并将其依次克隆入PET32a质粒，构建串联体融合表达载体P-DDKL，并转入Rosetta(DE3)中进行融合表达。在加入IPTG终浓度0.1mM诱导4h可达到最大表达量。命名为DDKL的重组蛋白表达产物经镍离子亲和层析柱纯化以及肠激酶裂解之后，对其进行抗菌活性分析。 结果证实抗菌肽DDK，DDL混剂对金黄色葡萄球菌(CowanⅠ)、E.coli DH5α、致病性E.coli O1、猪霍乱沙门氏菌、多杀性巴氏杆菌为代表的革兰氏阳性菌和阴性菌均显示出较好的抑菌杀菌活性。且在-7℃～100℃温度范围处理30 min，或pH3～pH10条件下处理仍具有抗菌活性。

语种： 中文

作者： 曹琦;黎满香;刘珂;颜运秋;卢帅

期刊： 动物医学进展,2009年30(4):43-46 ISSN：1007-5038

作者机构： 湖南农业大学动物医学院,湖南长沙,410128;[曹琦; 黎满香; 颜运秋; 刘珂; 卢帅] 湖南农业大学

关键词： Hadrurin抗菌肽;基因克隆;表达与纯化

摘要： Hadrurin是一种分离自毒蝎的高活性抗菌肽,对多种细菌有较强抑制活性。本试验构建Ha-drurin全基因并在其两端加入了可切除的保护性多肽基因;再酶切Hadrurin基因产生黏性末端并连入pET-32a（+）原核表达载体;IPTG诱导表达抗菌肽蛋白,亲和层析纯化抗菌肽蛋白。结果表明,构建的Ha-drurin全基因片段序列完全正确,连接进入pET-32a（+）表达载体的基因由0.1 mmol/L终浓度的IPTG诱导5 h可达到表达的高峰,重组蛋白经亲和层析可到达纯化的目的。

语种： 中文

作者： 李薇;李晶;余兴龙;罗维;白霞;...

作者机构： [李薇; 余兴龙; 罗维; 白霞; 李润成; 黎满香; 葛猛; 王亚; 向卫军; 李晶] 湖南农业大学动物医学院

会议名称： 中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

会议时间： 2009-09-01

会议地点： 南宁

会议论文集名称： 中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会论文集

关键词： 猪圆环病毒2群;感染性克隆;3种亚群;毒力

摘要： 本研究通过PCR扩增出猪圆环病毒2（PCV-2）三个亚群（1A、1B和1C）毒株的全基因组DNA序列,并分别克隆入pMD-18T载体,获得含有PCV-2全基因组的3个重组质粒,分别命名为RP8、P0、P4-1.将重组质粒大量提取后,用SacⅡ切出1767bp的PCV-2全基因组,在体外用T4 DNA连接酶使其自身连接环化。用脂质体将连接产物转染无PCV-1污染的PK-15细胞,并按常规病毒培养方法传代,第5代细胞培养物用间接免疫荧光试验（IFA）及PCR方法检测,并同时腹腔接种小鼠。结果:IFA和PCR实验均证实已经获得子代PCV-2病毒,并可在接种小鼠的血液中检测到PCV-2的基因组DNA。表明本试验构建的自身环化的PCV-2全基因组DNA在体内、外均具有感染性,为研究PCV-2的不同基因群毒株与毒力之间的关系打下了基础。

语种： 中文

作者： 葛猛;杨阳;蒋重合;李微;李润成;...

期刊： 湖南畜牧兽医,2009年(03):8-10 ISSN：1006-4907

作者机构： 湖南农业大学动物医学院,湖南,长沙,410128;[蒋重合; 葛猛; 李微; 李润成; 黎满香; 罗维; 余兴龙; 杨阳] 湖南农业大学

摘要： 猪圆环病毒2(Porcine circovirus 2,PCV2)与猪群中发生的许多疾病密切相关,诸如断奶仔猪多系统衰竭综合症(Postweaning multisystem wasting syndrome,PMWS)、猪皮炎肾炎综合症(Porcine dermatitis and nephropathy syndrome,PDNS)、母猪繁殖障碍、增生性肠炎、仔猪先天性震颤、猪呼吸道病复合症等,其中以PMWS最为常见,PMWS主要引起猪渐进性消瘦、腹泻、呼吸道症状、皮肤苍白或出现黄疸、生产性能降低.

语种： 中文

作者： 沈萍;黎满香

期刊： 安徽农业科学,2009年37(1):140-141 ISSN：0517-6611

作者机构： [沈萍; 黎满香] 湖南农业大学动物医学院;湖南生物机电职业技术学院

关键词： 猪链球菌;湖南分离株;耐药性

摘要： [目的]有效控制猪链球菌的传播。[方法]测定121株2型和7型湖南地区分离株对16种抗生素的耐药性。[结果]结果发现,猪链球菌湖南分离株（2型和7型）对红霉素、万古霉素、克林霉素和四环素具有高频的抗性,对氟哌酸、左氟沙星、环丙沙星、克拉霉素和青霉素G等抗生素较为敏感。细菌对敏感抗生素的抗性有上升趋势。[结论]该研究为养猪业临床治疗猪链球菌感染的用药提供依据。

语种： 中文

作者： 颜运秋;卿泰安;黎满香;刘珂;卢帅;...

期刊： 动物医学进展,2009年30(04):46-49 ISSN：1007-5038

作者机构： 湖南农业大学动物医学院,湖南长沙,410128;[黎满香; 卿泰安; 颜运秋; 刘珂; 郑元敬; 卢帅] 湖南农业大学

关键词： 猪链球菌;分离鉴定;生化试验;聚合酶链反应

摘要： 从病猪脏器病料中通过细菌培养、生化试验分离鉴定出了121株猪链球菌。经PCR技术鉴定马链球菌兽疫亚种28株,占23.1%,猪链球菌24株,占19.8%,其中猪链球菌2型4株,占3.3%,猪链球菌9型2株,占1.7%,猪链球菌1型和7型都没检测到,证实省内除了猪链球菌2型外,也存在其他血清型的猪链球菌。

语种： 中文

作者： 卢帅;黎满香;刘珂;颜运秋;郑元敬;...

期刊： 中国兽医科学,2009年39(12):1099-1103 ISSN：1673-4696

作者机构： 湖南农业大学,动物医学院,湖南,长沙,410128;[黎满香; 林荣高; 颜运秋; 刘珂; 郑元敬; 卢帅] 湖南农业大学

关键词： 抗菌肽Dermadistinctin;串联体;抗菌活性

摘要： 根据GenBank中Dermadistinctin K(DDK)和Dermadistinctin L(DDL)的氨基酸序列,选择大肠杆菌偏嗜性密码子,采用SOE法合成了DDK和DDL基因.在DDK及DDL基因序列中引入肠激酶裂解位点,并将其依次克隆入pET-32a(+)质粒,构建了串联体融合表达载体P-DDK,并将其转入Rosetta(DE3)中进行融合表达;表达产物在终浓度为0.1 mmol/L IPTG诱导4 h后可达到最大表达量.对重组蛋白DDK进行镍离子亲和层析柱纯化以及肠激酶裂解之后,对酶切产物进行了抑菌活性分析.分析结果表明,抗菌肽DDK与DDL的混合物对金黄色葡萄球菌(Cowan Ⅰ)、大肠杆菌DH5α、致病性大肠杆菌O_1、猪霍乱沙门氏菌、多杀性巴氏杆菌均具有一定的抑菌活性.

语种： 中文

作者： 黄泽彬;余兴龙;李润成;谢小雨;尹德明;...

期刊： 中国人兽共患病学报,2009年25(7):623-626 ISSN：1002-2694

作者机构： [黄泽彬; 余兴龙; 李润成; 谢小雨; 尹德明; 颜运秋; 白霞; 刘忠华; 丁建; 汪镇南; 黎满香] 湖南农业大学动物医学院

关键词： 猪肠道杯状病毒;猪札如病毒;腹泻;猪

摘要： 目的 了解国内猪札如病毒(猪肠道杯状病毒成员)的存在和流行情况.方法 从多个腹泻猪场共采集腹泻猪粪便189份,采用RT-PCR方法进行分子流行病学调查.结果 检出猪札如病毒阳性病料24份,阳性率为12.70%(24/189).测序后与国外已发表的毒株比较,表明了所测定流行毒株的序列与猪札如病毒代表株Cowden相近(同源性介于75.6%～88.3%之间),证实了其均为猪札如病毒.结论 首次发现我国猪群中存在猪札如病毒.

语种： 中文

作者： 李润成;余兴龙;白霞;向卫军;葛猛;...

期刊： 生物工程学报,2009年25(4):560-565 ISSN：1000-3061

通讯作者： Yu, X.

作者机构： [李润成; 余兴龙; 白霞; 向卫军; 葛猛; 黎满香] 湖南农业大学动物医学院

通讯机构： College of Animal Medicine, Hunan Agricultural University, China

关键词： 口蹄疫病毒;VP1基因;LTB基因;抗体效价

摘要： 以质粒pMDTLT为模板,用PCR的方法扩增出LTB基因,然后将其插入到pETVP1质粒中VP1基因的上游,构建了含有融合基因LTBVP1的表达质粒pETLTBVP1.转化宿主菌BL21(DE3)LysS后进行诱导表达,诱导菌经SDS-PAGE显示重组蛋白以包涵体的形式表达,分子量约为39 kD;Western blotting分析表明,重组蛋白能与FMDV阳性血清及兔抗霍乱毒素(CT)血清反应,说明融合蛋白保持了LTB和VP1各自的免疫学活性.小鼠免疫实验表明:该融合蛋白通过腹腔接种小鼠能诱导产生较强的免疫应答反应,免疫鼠产生的血清抗体水平高于试验中商品口蹄疫疫苗免疫组.

语种： 中文

作者： 卢帅;黎满香;刘珂

作者机构： [卢帅; 黎满香; 刘珂] 湖南农业大学动物医学院

会议名称： 中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

会议时间： 2009-09-01

会议地点： 南宁

会议论文集名称： 中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会论文集

关键词： Dermadistinctin抗菌肽;串联体;活性鉴定

摘要： 本文根据GenBank中的Dermadistinctin K(DDK),Dermadistinctin L(DDL)的氨基酸序列,选择大肠杆菌偏好密码子,采用SOE法合成了抗菌肽DDK,DDL基因.在DDK,DDL中引入肠激酶裂解位点,并将其依次克隆入PET32a质粒,构建串联体融合表达载体P-DDKL,并转入Rosetta(DE3)中进行融合表达.在加入IPTG终浓度0.1mM诱导4h可达到最大

语种： 中文

作者： 白霞;李润成;余兴龙;丁建;黎满香

期刊： 湖南农业大学学报(自然科学版),2008年34(5):568-571 ISSN：1007-1032

作者机构： [白霞; 李润成; 余兴龙; 丁建; 黎满香] 湖南农业大学动物医学院

关键词： 猪瘟病毒;Erns基因;定点突变;RNase酶活性;原核表达

摘要： 利用重组PCR技术将猪瘟病毒兔化弱毒株(Hog cholera virus lapinized Chinese strain,HCLV)E~(rns)编码区30位His残基密码子CAT突变为Pro残基密码子CCC,将突变后的基因克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,构建成重组质粒pETmE~(rns),并将此重组子转入宿主菌BL21(DE3)plysS中,在IPTG的诱导下表达重组转化菌.结果:突变的mE~(rns)基因能在pET表达系统成功表达.用Western blotting检测表明,所表达的蛋白是猪瘟病毒特异性的,但克隆于pET-28a(+)中未突变的E~(rns)基因却不能表达,说明E~(rns)基因的RNA酶活性是影响该基因在Escherichia coli中表达的因素之一.

语种： 中文

作者： 尹可;郭军庆;黄杰;黎满香;周继勇

期刊： 中国兽医科学,2008年38(9):762-766 ISSN：1673-4696

作者机构： [尹可; 黄杰; 黎满香] 湖南农业大学动物医学院;[郭军庆; 周继勇] 浙江大学动物预防医学研究所;浙江大学传染病诊治国家重点实验室人兽共患病研究室

关键词： 猪流感病毒;H5亚型;HA1蛋白

摘要： 利用化学合成技术合成H5亚型猪流感病毒（SIV）的HA1基因，克隆到原核表达载体pET-28a（＋），构建了重组表达质粒pET28a—HA1／H5，用重组质粒转化表达菌株E．coli BL2l（DE3），经IPTG诱导表达，以镍螯合层析纯化表达蛋白；通过优化反应条件，建立了基于HA1重组蛋白的H5亚型SIV抗体间接ELISA（iHA1-ELISA）检测方法。SDS—PAGE分析结果显示，在大肠杆菌中成功表达了分子质量为45ku的His—HA1融合蛋白，表达蛋白以包涵体形式存在；Western—blot分析结果显示，表达蛋白能被抗His单克隆抗体和抗H5亚型SIV阳性血清特异识别。优化iHAI—ELISA中HA1／H5重组蛋白的包被浓度为0．31μg／mL，待检血清的最佳稀释度为1：100。特异性测定结果显示，iHA1-ELISA方法不与H1、H3、H9亚型猪流感病毒抗体以及猪圆环病毒、猪生殖与呼吸综合征病毒阳性血清发生交叉反应；iHA1-ELISA方法与血凝抑制试验的符合率达93．5％。表明利用重组HA1蛋白建立的检测H5亚型SIV抗体的ELISA方法具有良好的特异性和敏感性。

语种： 中文

作者： 刘珂;周斌;黄杰;尹可;卿泰安;...

期刊： 动物医学进展,2008年29(5):40-42 ISSN：1007-5038

作者机构： 湖南农业大学动物医学院,湖南长沙,410128;南京农业大学动物医学院,江苏南京,210095;[黎满香; 卿泰安; 尹可; 刘珂; 黄杰] 湖南农业大学;[周斌] 南京农业大学

关键词： 猪瘟病毒;抗原表位;表达;免疫印迹

摘要： 以猪瘟病毒全长基因组质粒为模板,PCR扩增出E2囊膜糖蛋白上A/D抗原区B细胞表位878aa～938 aa;PCR扩增片段连接到pET-32a(+)载体构建pET-AD原核表达质粒,将阳性质粒转化到BL21大肠埃希菌中诱导表达,以Ni-NTA亲和柱纯化,纯化后的蛋白进行Western blot鉴定.结果表明,重组质粒pET-AD在BL21大肠埃希菌中可以高效表达,表达的蛋白质经纯化后仍然有反应原性.

语种： 中文

作者： 黄杰;杨明娴;刘珂;黎满香

期刊： 动物医学进展,2008年29(9):91-94 ISSN：1007-5038

作者机构： 湖南农业大学动物医学院,湖南长沙,410128;浙江大学动物预防医学研究所,浙江杭州,310029

关键词： 新城疫;诊断技术;研究进展

摘要： 新城疫是危害世界养禽业的最严重的传染病之一，由于其传播速度快，给养殖业带来了极大的经济损失，因此对于该病的研究具有重要的意义。文章就新城疫诊断技术发展概况进行了综述，主要包括传统的病毒分离与鉴定、血清学诊断方法以及分子生物学检测方法。

语种： 中文

作者： 雷红宇;胡仕凤;宁玲忠;黎满香;袁建平

期刊： 中国家禽,2007年29(7):11-12 ISSN：1004-6364

作者机构： 湖南农业大学动物医学院,湖南长沙,410128;[胡仕凤; 宁玲忠; 黎满香; 袁建平; 雷红宇] 湖南农业大学

关键词： 鸭疫里默氏菌;鸭;疫苗

摘要： 为了有效控制鸭疫里默氏菌病的发生,我们将本地区分离鉴定的鸭疫里默氏菌作为菌种,采用液体增菌培养后灭活,加入佐剂制成油乳剂灭活疫苗,经无菌和安全检验合格后免疫4日龄雏鸭(0.5mL/只).结果表明该疫苗免疫效果良好,一次免疫后保护率达70%,两次免疫后保护率达95%.

语种： 中文

作者： 李润成;罗卫强;刘雪松;白霞;肖调义;...

期刊： 湖南畜牧兽医,2007年(3):9-11 ISSN：1006-4907

作者机构： 湖南农业大学动物医学院;[罗卫强] 东莞市兽医卫生检疫监督所;湖南农业大学园林学院;湖南农业大学动物科技学院;[白霞; 刘雪松; 李润成; 黎满香; 肖调义; 余兴龙] 湖南农业大学

关键词： 口蹄疫;抗体检测;酶联免疫吸附试验;正向间接血凝

摘要： 应用两种ELISA试剂盒和一种正向间接血凝试剂盒对125份免疫猪血清进行了口蹄疫抗体水平测定，并对三种试剂盒测定结果的符合程度、及其各自的重复性进行了分析。试验结果表明三种试剂盒测得的抗体水平之间有较好的一致性，但两种ELISA试剂盒检测结果之间的一致性要略高于正向间接血凝与两种ELISA试剂盒之间的一致性；三种试剂盒各自的检测结果重复性良好。

语种： 中文

作者： 李传金;黎满香;邓凯

期刊： 湖南畜牧兽医,2007年(04):27-29 ISSN：1006-4907

作者机构： 湖南农业大学动物医学院,湖南,长沙,410128;张家界市畜牧局,湖南,张家界,427000;[邓凯] 武陵源区科技局;[黎满香; 李传金] 湖南农业大学

关键词： 猪低温病;伤寒感冒;猪瘟;防治

摘要： 近两年来,张家界部分乡镇陆续发生猪低温病,为了有效区别猪低温病与非典型伤寒感冒和非典型性猪瘟,笔者从发病原因、临床症状及防治措施进行了探索性研究,旨在为控制该病提供依据.

语种： 中文

作者： 卿泰安;颜运秋;黎满香

期刊： 动物医学进展,2007年28(5):16-19 ISSN：1007-5038

作者机构： 湖南农业大学动物医学院,湖南长沙,410128;[黎满香; 颜运秋; 卿泰安] 湖南农业大学

关键词： 猪链球菌;药敏试验;耐药性

摘要： 对来自湖南省不同地区的疑似猪链球菌病病料进行分离鉴定，并对鉴定出来的猪链球菌进行生化试验和药敏试验。结果表明，生化试验除乳糖、甘露醇、山梨醇外，其他差异不大；药敏试验中菌株之间差异较大，大部分菌株呈多重耐药性，其中对磺胺甲口恶唑的耐药率达100％，四环素的耐药率为100%～92．3％，对大环内酯类的耐药率为84．6％～69．2％，氨基糖苷类为69．2％～46．2％，头孢菌素类为69．2％～30．8%，对青霉素类药物的耐药率最低，除阿莫西林较高敏感（84．6％）外，多为中度敏感，对其他药物的敏感率均低于50%。说明湖南省猪链球菌耐药率普遍较高，养殖场应予以高度重视。

语种： 中文

作者： 黄维娟;董丽波;张烨;温乐英;赵翔;...

期刊： 病毒学报,2007年23(5):345-349 ISSN：1000-8721

通讯作者： Huang, W.J.

作者机构： [黄维娟; 黎满香] 湖南农业大学,动物医学院;[董丽波; 张烨; 温乐英; 赵翔; 郭俊峰; 蓝雨; 李梓; 王敏; 董婕; 郭元吉; 舒跃龙] 中国疾病预防控制中心,病毒病预防控制所,国家流感中心

关键词： H3N2亚型流感病毒;神经氨酸酶基因;变异

摘要： 测定了1996～2005年间在中国分离并保存的395株H3N2亚型人流感病毒神经氨酸酶(NA)基因序列,应用生物信息学工具进行了分析.结果表明:NA基因序列的进化树表现为一主要进化主干伴随多侧分支进化,同一年份的毒株可以分为几个分支存在;疫苗株在NA基因序列进化树上存在明显的滞后现象;NA没有氨基酸的丢失与插入;抗原决定簇大部分位点保守且各抗原决定簇之间的变异情况各有特点,其中197～199位、431～434位和339～347位点的变异频率最高,而153位、328～336位、367～370位、400～403位抗原决定簇的氨基酸变异频率相对比较小;除了抗原决定簇外还有些氨基酸位点的变异频率很高,它们分别是18、23、30、93、143、208、216、221、249、265、267、307、385、437位氨基酸,其中143位和267位这两个位点的变异频率高于抗原决定簇位点,具体生物学意义还需要进一步研究;NA蛋白的酶活性中心位点高度保守;二硫键和糖基化位点保守.NA基因的这些特点为流感的预防、控制以及NA抑制剂药物的应用提供了一定的参考依据.

语种： 中文

作者： 邱伯根;郭永祥;刘道新;张强;邱立新;...

期刊： 中国家禽,2007年29(13):28-29 ISSN：1004-6364

作者机构： 湖南农业大学动物医学院;[何世成; 张强; 谈志祥; 范仲鑫; 邱立新] 湖南省兽医总站;[彭晋勇; 武维宝] 汉寿县动物防疫监督站;[曾少才; 黄艳平] 沅江市动物防疫监督站;[郭永祥; 邱伯根; 黎满香; 刘道新; 唐小明; 刘广红] 湖南农业大学

摘要： 　　水禽特别是鸭是禽流感病毒的贮存库,也是易感宿主,在AIV传播扩散和生物学进化中发挥了重要作用[1].对鸭群进行全面免疫是预防控制禽流感的关键措施,也是国家禽流感免疫政策的要求.但是,在目前家鸭饲养分散、乡村动物防疫力量比较薄弱的情况下,如何做到农村散养鸭免疫到位,一直是禽流感防控中的难题.本试验使用H5N1亚型重组禽流感油佐剂灭活疫苗,按照多种免疫程序免疫农村散养鸭,探讨不同免疫程序的免疫效果,以期为制定一个科学合理的农村散养鸭免疫程序提供科学依据.……

语种： 中文