抗菌肽Dermadistinctin—Q1的原核表达及其生物活性鉴定
作者：
刘诚;黎满香;卢帅
期刊：
中国饲料 ,2013年(23):17-20+23 ISSN：1004-3314
作者机构：
广西大学动物科学技术学院;湖南农业大学动物医学院;[卢帅] 宁乡县畜牧兽医水产局;[刘诚] 广西大学;[黎满香] 湖南农业大学
关键词：
抗菌肽;原核表达;生物活性
摘要：
试验对抗菌肽Dermadistinctin—Q，（DDQl）进行原核表达，并对其生物活性进行检测。采用重叠区扩增基因拼接法，多步PCR获得抗茵肽DDQ。全基因，并使用原核表达载体pET一32a（＋）构建工程茵。通过优化诱导表达时间和异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）终浓度，实现融合蛋白表达条件最佳化。利用肠激酶从融合蛋白中分离抗茵肽DDQ。后，使用Ni离子亲和层析法进行纯化。进一步的生物活性检测表明，抗茵肽DDQ。具有广谱抗菌活性和一定的热、酸耐量性．是一类极具开发潜力的新型药物．
语种：
中文
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粪肠球菌生物膜形成过程中群体感应相关基因的表达研究
作者：
卢志山;孟磊;柳忠豪;任光辉;孙爱杰;...
期刊：
中华口腔医学杂志 ,2013年48(8):485-489 ISSN：1002-0098
通讯作者：
Lu, Z.S.
作者机构：
[卢志山; 孟磊; 柳忠豪; 任光辉; 孙爱杰; 刘湘梅] 滨州医学院附属烟台市口腔医院牙体牙髓科,山东烟台,264008
关键词：
肠球菌,粪;生物膜;群体感应;基因表达
摘要：
目的 研究粪肠球菌生物膜形成过程中群体感应相关基因的表达情况,探讨其与生物膜形成的相关性.方法 体外建立粪肠球菌生物膜模型,激光共聚焦显微镜观察6、12、24、48 h生物膜的形成情况,结晶紫染色观察粪肠球菌生物膜形成的量,提取各时期生物膜细菌样本,通过实时荧光定量PCR对粪肠球菌生物膜形成过程中群体感应相关基因fsrB、明胶酶和丝氨酸蛋白酶(serine protease,sprE)的表达进行检测.结果 粪肠球菌生物膜细菌分布不均匀,由死细菌和活细菌组成,6h时粪肠球菌生物膜细菌初始黏附,24 h时生物膜基本成熟；24 h内粪肠球菌生物膜的量随时间增加而增大,在培养0、6、12、24 h时生物膜的量(A值)分别为0.00±0.00、1.09±0.13、2.10 ±0.79及3.30 ±0.13,两两比较差异均有统计学意义(P ＜0.05)；48 h生物膜的量(3.51±0.01)与24 h生物膜的量相比略有增加,但差异无统计学意义.粪肠球菌生物膜形成过程中群体感应相关基因fsrB在0、6、12、24 h时的表达量(2-△CT值)逐渐增大,分别为9.98 ±0.46、23.45±1.13、47.30±2.49及331.30±2.18,两两比较差异均有统计学意义(P ＜0.05)；48 h粪肠球菌生物膜内fsrB的表达量(11.0±0.39)与0h相比差异无统计学意义.明胶酶在0、6、12、24 h时的表达量(2-△CT值)逐渐增大,分别为6.54±0.73、14.26±1.24、37.47±2.35及264.80±5.10,两两比较差异均有统计学意义(P ＜0.05)；48 h粪肠球菌生物膜内明胶酶的表达量(9.09±0.81)与0h相比差异无统计学意义.sprE在0、6、12、24 h时的表达量(2-△CT值)逐渐增大,分别为7.72±0.74、21.15±0.96、49.87±3.18及441.89±7.74,两两比较差异有统计学意义(P＜0.05)；48 h粪肠球菌生物膜内sprE的表达量(11.04± 1.74)与0h相比差异无统计学意义.结论 粪肠球菌6h初始黏附,24h生物膜基本成熟,群体感应相关基因fsrB、明胶酶和sprE在粪肠球菌生物膜6～24h即初始黏附、形成及发展期起重要作用.
语种：
中文
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产蛋下降综合征病毒纤突蛋白Knob-S区原核表达及其活性分析
作者：
陈滔;唐应华;陆吉虎;高峰;于漾;...
期刊：
动物医学进展 ,2012年33(6):41-44 ISSN：1007-5038
作者机构：
[陈滔; 高峰; 黎满香] 湖南农业大学动物医学院;[唐应华; 陆吉虎; 于漾; 何家惠; 侯继波] 江苏省农科院
关键词：
产蛋下降综合征病毒;原核表达;Knob-S区
摘要：
通过PCR扩增得到产蛋下降综合征病毒(EDSV)纤突蛋白Knob-S区基因,将其克隆至原核表达载体pET-32(a)的多克隆位点构建了原核表达载体pET-32 (a)-Knob-S,将其转化至感受态细胞BL21中,经IPTG诱导,SDS-PAGE分析,结果获得了42 ku的融合蛋白,用纯化的融合蛋白免疫鸡制备抗血清,通过血凝试验、Western blot和血凝抑制试验分析,表明该融合蛋白不能凝集鸡红细胞,无血凝活性；但可与EDSV阳性血清发生特异反应,并诱导机体产生特异性抗体,具有很好的抗原性.
语种：
中文
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抗菌肽Dermadistinctin-K的原核表达及生物活性鉴定
作者：
刘诚;黎满香;卢帅;蒋伟
期刊：
中国兽医科学 ,2012年42(5):517-522 ISSN：1673-4696
作者机构：
[刘诚; 黎满香; 卢帅; 蒋伟] 湖南农业大学动物医学院
关键词：
抗菌肽;原核表达;生物活性
摘要：
为了获得抗菌肽Dermadistinctin-K并鉴定其生物活性,依据GenBank中的氨基酸序列,使用化学合成和PCR相结合的方法获得了完整的Dermadistinctin-K基因序列;使用表达载体pET-32a(+)构建工程菌;用IPTG诱导融合蛋白表达并优化其表达条件,在IPTG终浓度0.1mmol/L下诱导5h表达量最大;最后用His-tag protein Purification kit纯化了融合蛋白,使用肠激酶酶切获得目的蛋白,并进行生物活性鉴定。分析结果表明,抗菌肽Dermadistinctin-K具有抗菌活性和一定的耐热性,其生物活性与pH值密切相关。
语种：
中文
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RT-PCR test for detecting porcine sapovirus in weanling piglets in Hunan Province, China
作者：
Liu, Guo-Hua;Li, Run-Cheng;Huang, Ze-Bin;Yang, Jun;Xiao, Chao-Ting;...
期刊：
Tropical Animal Health and Production ,2012年44(7):1335-1339 ISSN：0049-4747
通讯作者：
Yu, Xing-Long
作者机构：
[Li, Man-Xiang; Yu, Xing-Long; Yang, Jun; Liu, Guo-Hua; Li, Jing; Li, Run-Cheng; Huang, Ze-Bin; Xiao, Chao-Ting; Yan, Yun-Qiu] Hunan Agr Univ, Coll Vet Med, Changsha 410128, Hunan, Peoples R China.;[Yang, Jun] Hunan Inst Anim & Vet Sci, Changsha 410128, Hunan, Peoples R China.;[Li, Jing] Anim Husb & Aquaculture Bur Taojiang, Yiyang 410128, Hunan, Peoples R China.
通讯机构：
[Yu, Xing-Long] H;Hunan Agr Univ, Coll Vet Med, Changsha 410128, Hunan, Peoples R China.
关键词：
Porcine sapovirus;Prevalence;Swine;RT-PCR;Phylogenetic analysis;Hunan province;China
摘要：
The prevalence of porcine sapovirus infection in weanling pigs was investigated in Hunan Province, China, between August 2006 and October 2007. A total of 153 diarrheic fecal samples from ten intensive pig farms from ten representative administrative regions in Hunan province were examined for porcine sapoviruses using RT-PCR. Twenty-two of 153 (14.37 %) samples were found to contain porcine sapoviruses. Phylogenetic analysis showed that all the porcine sapovirus isolates in Hunan Province belonged to the porcine sapovirus genogroup III. The results of the present investigation have implications for the control of porcine sapovirus infection in pigs in Hunan Province, China.
语种：
英文
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湖南省猪源粪肠球菌AFLP分析
作者：
田世成;黎满香;蒋伟;林荣高;郭洪香;...
期刊：
动物医学进展 ,2012年33(10):28-32 ISSN：1007-5038
作者机构：
湖南农业大学动物医学院,湖南长沙,410128;[屈泰龙; 郭洪香; 田世成; 黎满香; 林荣高; 蒋伟] 湖南农业大学
关键词：
粪肠球菌;扩增片段长度多态性;接头序列
摘要：
为探讨分离自湖南省不同地区的42株猪源粪肠球菌的亲缘关系,采用扩增片段长度多态性（AFLP）方法对此42株分离菌进行分型研究。结果表明,湖南地区分离到的粪肠球菌在基因上存在多样性,按照同源性为75%分类可以获得21种基因型;分离株CS64、CS81和CS86有着很近的亲缘关系,且所获得AFLP图谱与菌株毒力基因型有一定的相关性。本试验应用AFLP技术分析猪源粪肠球菌基因水平的差异,同时结合以往对分离株的初步鉴定,进一步确定了其所在种,并了解不同地理种群已出现了分化。
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中文
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CRISPR系统结构与功能研究进展
作者：
蒋伟;黎满香;田世成;颜运秋
期刊：
动物医学进展 ,2012年33(10):82-86 ISSN：1007-5038
作者机构：
[蒋伟; 黎满香; 田世成; 颜运秋] 湖南农业大学动物医学院
关键词：
CRISPR位点;噬菌体;质粒;外源基因片段
摘要：
自然界中的微生物总是通过各种各样的保护机制,使它们能够与恶劣的环境及侵袭性核酸共存。许多微生物都能通过基于基因序列特异性的方式抵抗核酸入侵。CRISPR (clustered regularly interspaced short palindromic repeats)即是属于这种保护机制之一。该位点是由独特的DNA间区间隔开的短的重复序列组成,并与一些被称为CRISPR相关蛋白(CRISPR association protein)的蛋白质共同作用,形成一套完整的自我保护机制。这种高变位点能从外源片段中摄取约36 bp的短片段,从而建立可遗传的、DNA介导的"特异性免疫保护机制"。
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中文
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抗菌肽研究进展
作者：
刘诚;黎满香;卢帅;林荣高;蒋伟;...
期刊：
动物医学进展 ,2011年32(3):94-99 ISSN：1007-5038
作者机构：
[刘诚; 黎满香; 卢帅; 林荣高; 蒋伟; 胡杨] 湖南农业大学动物医学院
关键词：
抗菌肽;生物特性;小分子多肽;耐药性
摘要：
由于细菌对抗生素耐药性不断出现,研发新型抗菌药物已迫在眉睫。抗菌肽是一种广泛存在于生物体内具备多生物活性的小分子多肽,其独特的抗菌机制和细菌不易对其产生耐药性,已倍受人们关注。论文对抗菌肽来源、分类以及生物特性、相关数据库基本情况、存在的问题等方面研究进展进行综述。
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中文
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如何将家畜传染病学教学与生产实践相结合
作者：
董伟;黎满香;颜运秋
期刊：
科教文汇(下旬刊) ,2011年(24):137-138 ISSN：1672-7894
作者机构：
湖南农业大学动物医学院,湖南长沙,410128
关键词：
家畜传染病学;教学;生产实践
摘要：
为了提高家畜传染病学的教学效果,有必要将家畜传染病教学与动物疫病防控生产实践相结合。本文就家畜传染病学教学内容更新,总论、各论和实验教学方法提出了如何将家畜传染病学教学与动物疫病防控生产实践相结合。
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中文
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湖南猪源粪肠球菌的分离鉴定及16S rDNA系统进化分析
作者：
黎满香;林荣高;薛立群;蒋伟;陈滔
期刊：
中国兽医学报 ,2011年31(9):1290-1294 ISSN：1005-4545
作者机构：
[黎满香; 林荣高; 薛立群; 蒋伟; 陈滔] 湖南农业大学动物医学院
关键词：
粪肠球菌;鉴定
摘要：
从湖南各地送检至实验室的临床样本中分离到42株革兰氏染色阳性及过氧化氢酶阴性的球菌,其中78.6%来自于肺脏,菌落形态及染色镜检均与粪肠球菌参考株ATCC 29212相似,兰氏分群鉴定97.6%（41/42）为D群,生化特性符合粪肠球菌特征。16SrDNA测序鉴定显示：42个分离株与同步测序的ATCC 29212同源性在99.2%到100%之间,与所选择粪肠球菌参考序列的同源性在98.7%到100%之间,NCBI在线BLAST分析发现42株均与GeneBank收录的粪肠球菌序列同源性最高。湖南分离株16SrDNA序列与E.faecalis参考序列进化关系与地域分布无关,来源于不同宿主的菌株的16SrDNA变异并不大,而与E.faecium、E.canis、E.avium、E.hirae等4种肠球菌则有多处变异,这些变异区域在这4种肠球菌中却是保守的。
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中文
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肠球菌研究进展
作者：
蒋伟;黎满香;林荣高;田世成
期刊：
动物医学进展 ,2011年32(5):94-98 ISSN：1007-5038
作者机构：
湖南农业大学动物医学院,湖南长沙,410128;[田世成; 黎满香; 林荣高; 蒋伟] 湖南农业大学
关键词：
肠球菌;毒力基因;致病性
摘要：
肠球菌（Enterococcus）是革兰阳性、过氧化氢酶阴性球菌,是人和动物肠道内主要常存菌群。该菌可引起群体致病和医院交叉感染,临床上表现为尿路感染、菌血症、心内膜炎等,加之许多报道显示肠球菌对多种抗生素都有耐药性和具有较强的致病性,因此越来越受到人们的关注。论文从生物学特性、毒力因子、耐药性、流行病学、临床检测等方面对该菌的研究现状进行概述。
语种：
中文
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猪链球菌2型湖南分离株4种毒力基因的序列分析
作者：
黎满香;林荣高;颜运秋;卿泰安;卢帅;...
期刊：
中国兽医杂志 ,2011年47(2):12-14 ISSN：0529-6005
作者机构：
湖南农业大学动物医学院,湖南长沙,410128
关键词：
猪链球菌2型;毒力因子;序列分析
摘要：
本试验对猪链球菌2型湖南分离株的cps2j、mrp、epf、sly四种毒力基因进行部分序列扩增、测序后分析,结果表明,4株2型猪链球菌均可检出这四种毒力基因,其中cps2j、epf、sly三基因与国内外报道其他分离株具有很高同源性（98%以上）。然而湖南分离株Hunan-An1、Hunan-An2、Hunan-Ping的mrp基因与其他对比菌株相比同源性低,进化关系远,有较大变异。
语种：
中文
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Survey of Enterococcus faecalis in Diseased Swine in Hunan Province, China
作者：
Jiang, Wei;Tian, Shi-Cheng;Li, Run-Cheng;Yan, Yun-Qiu;Wang, Ying-Zi;...
期刊：
THAI JOURNAL OF VETERINARY MEDICINE ,2011年41(3):383-386 ISSN：0125-6491
通讯作者：
Li, Man-Xiang
作者机构：
[Li, Man-Xiang; Jiang, Wei; Tian, Shi-Cheng; Li, Run-Cheng; Yan, Yun-Qiu] Hunan Agr Univ, Coll Vet Med, Changsha 410128, Hunan, Peoples R China.;[Wang, Ying-Zi] Hunan Agr Univ, Natl Res Ctr Engn & Technol Utilizat Funct Ingred, Changsha 410128, Hunan, Peoples R China.
通讯机构：
[Li, Man-Xiang] H;Hunan Agr Univ, Coll Vet Med, Changsha 410128, Hunan, Peoples R China.
关键词：
China;Diseased swine;Enterococcus faecalis;Survey
摘要：
The prevalence of Enterococcus faecalis was investigated in diseased swine in Hunan Province, China between February 2007 and February 2011. A total of 385 diseased swine dissected in prosectorium from 10 representative administrative regions in Hunan Province were examined for the presence of E. faecalis. Forty-two out of 385 (10.91%) diseased swine were found to be infected with E. faecalis by bacteria isolations. E. faecalis was mainly recovered from the lung and joint cavity. Identification of the organisms was based on biochemical assays and sequencing of the partial 16S rRNA. The results of the present investigation have implications for the ongoing control of E. faecalis infections in swine and humans in Hunan Province, China.
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一例猪瘟、链球菌混合感染的诊治
作者：
颜运秋;黎满香;尹德明;李润成;卢帅
期刊：
中国动物检疫 ,2010年(05):51-52 ISSN：1005-944X
作者机构：
湖南农业大学动物医学院
关键词：
猪瘟;链球菌;诊断
摘要：
湖南长沙某个体自繁自养猪场发生疫情，本试验结合流行病学调查、临床检查进行了病理剖检与实验室诊断，确诊为猪瘟病毒、链球菌混合感染。
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蛙皮肤抗菌肽Dermadistinctin-L原核表达载体的构建
作者：
郑元敬;黎满香;刘珂;颜运秋;徐波;...
期刊：
湖北畜牧兽医 ,2010年(05):6-7 ISSN：1007-273X
作者机构：
湖南农业大学动物医学院,长沙,410128;[徐波; 黎满香; 林荣高; 颜运秋; 刘珂; 郑元敬; 卢帅] 湖南农业大学
关键词：
抗菌肽Dermadistinctin-L;密码子优化;PCR扩增;表达载体构建
摘要：
根据GenBank中公布的猴蛙皮肤抗菌肽Dermadistinctin-L（DDL）成熟肽氨基酸序列,选择大肠杆菌偏爱密码子,设计合成了3条互补引物,通过PCR扩增得到完整的Dermadistinctin-L基因序列。将获得的基因序列克隆到原核表达载体pET-32a（+）,经酶切鉴定和序列分析证明成功构建了pET32a-DDL表达载体,表达载体的正确构建为Dermadistinctin-L的高效表达和生物学活性研究奠定了基础。
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粪肠球菌PCR检测方法的建立
作者：
黎满香;林荣高;薛立群;蒋伟;陈滔
期刊：
中国兽医科学 ,2010年40(12):1255-1258 ISSN：1673-4696
作者机构：
湖南农业大学,动物医学院,湖南,长沙,410128;[薛立群; 黎满香; 林荣高; 陈滔; 蒋伟] 湖南农业大学
关键词：
粪肠球菌;聚合酶链反应;检测
摘要：
为建立一种基于细菌16 S rDNA的粪肠球菌PCR检测方法,用于检测临床样本和鉴定分离纯化的细菌,通过比较肠球菌间16 S rDNA的差异,设计了1对特异性引物,并对PCR反应条件进行了优化,对PCR的特异性和敏感性进行了检测。结果显示,粪肠球菌ATCC29212及42个鉴定阳性的临床分离株为PCR阳性,检测结果与16 S rDNA测序的鉴定结果一致,其他种属的4株菌为PCR阴性,所得扩增条带单一且与预期的产物大小一致,测序表明该条带为目的条带;该方法的最小检出量为134 CFU,并能直接对病料进行检测。表明所建立的PCR方法能特异地检测粪肠球菌,且敏感、简易、快捷,适用于实验室的日常检测。
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猪链球菌分子生物学分型方法研究进展
作者：
林荣高;黎满香;蒋伟;陈滔
期刊：
动物医学进展 ,2010年(10):83-87 ISSN：1007-5038
作者机构：
湖南农业大学动物医学院
关键词：
猪链球菌;分子生物学;分型
摘要：
猪链球菌是猪重要的致病菌,其种类繁多,鉴定困难。传统分型方法包括兰氏分群法,荚膜抗原分型,溶血性分型及生化分型法等。分子生物学技术的发展给猪链球菌的分型带来新的思路。论文对猪链球菌分子生物学分型方法进行介绍,包括多位点序列分型技术、脉冲场凝胶电泳、扩增片段长度多态性、随机扩增的多态性DNA、限制性片段长度多态性、核糖体分型,PCR-限制性片段长度多态性和测序。
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传染性支气管炎病毒结构蛋白研究进展
作者：
宋翥远;卿上田;肖朝庭;黎满香
期刊：
动物医学进展 ,2010年31(6):100-102 ISSN：1007-5038
作者机构：
湖南农业大学动物医学院;[卿上田] 湖南省兽医总站;[宋翥远; 肖朝庭; 黎满香] 湖南农业大学
关键词：
传染性支气管炎;S蛋白;N蛋白;M蛋白
摘要：
传染性支气管炎是禽类最重要疾病的之一,给家禽业造成了重大的经济损失。基因突变、重组和免疫压力等因素都可能引起鸡传染性支气管炎病毒发生遗传变异,给该病的预防和控制带来了很大的困难。近年来国内外学者在分子生物学方面的研究不断深入,在病毒基因组的结构与功能,以及结构蛋白的研究方面取得了重要进展。论文就分子生物学领域对IBV结构蛋白的结构特性及生物学功能等方面的研究概况做一综述,以揭示IBV的致病机理和分子变异机制,为有效防控IB提供科学依据。
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中华竹鼠水肿病的诊断与治疗
作者：
颜运秋;尹德明;黎满香;蒋大良
期刊：
动物医学进展 ,2010年31(7):124-125 ISSN：1007-5038
作者机构：
湖南农业大学动物医学院,湖南长沙,410128
关键词：
中华竹鼠;水肿病;诊断;药敏试验
摘要：
湖南郴州某中华竹鼠养殖场发生疫情,结合流行病学调查、临床检查进行了病理剖检与实验室诊断,确诊为大肠埃希菌引起的中华竹鼠水肿病,并通过药敏试验筛选敏感药物进行治疗,较好地控制了疫情。
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重组表达抗菌肽Hadrurin抗菌活性分析
作者：
黎满香;卢帅;刘坷;颜运秋;郑元敬;...
期刊：
中国预防兽医学报 ,2010年32(3):205-209 ISSN：1008-0589
作者机构：
[黎满香; 卢帅; 刘坷; 颜运秋; 郑元敬; 林荣高; 刘诚] 湖南农业大学动物医学院
关键词：
重组抗菌肽;抗菌活性
摘要：
为了给表达高活性的抗菌肽Hadrurin提供开发应用的依据,进一步为用基因工程方法生产具有多种生物活性的抗菌肽Hadrurin蛋白提供研究基础,本研究表达获得重组抗菌肽Hadrurin（rHadrurin）蛋白的基础上,将纯化的rHadrurin蛋白进行肠激酶酶切,恢复其天然活性结构。用最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC）方法检测抗菌肽Hadrurin在不同剂量、不同pH值、不同保存温度下对鸡致病性大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌活性及杀菌活性。并以小鼠为动物模型,进行抗菌肽rHadrurind对小鼠的体内保护实验。结果表明抗菌肽rHadrurin对上述细菌的最小抑菌范围为1.32μg/mL～4.32μg/mL,最小杀菌范围为1.77μg/mL～8.54μg/mL,而且-70℃～100℃及在pH3～pH10条件下仍具有高效抗菌活性。240μg/只剂量的抗菌肽蛋白可有效预防保护小鼠免受致死剂量鸡致病性大肠杆菌攻击,320μg/只剂量可达到保护率85%以上。
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