作者： 邓清文;秦乐娟;胡泽奇;徐舟;王江平;...

期刊： 湖南畜牧兽医,2024年(01):25-28 ISSN：1006-4907

作者机构： 湖南农业大学动物医学院,湖南长沙 410128;湖南龙华农牧发展有限公司,湖南茶陵 412400;[徐舟; 胡泽奇; 李润成; 邓清文] 湖南农业大学;[秦乐娟; 王江平] 湖南省龙华农牧发展有限公司

关键词： 疫苗免疫;病毒血症;日增重;料重比

摘要： 为了比较不同厂家疫苗对圆环病毒2d亚型(PCV2d)的防控效果,试验将相同批次的28 d龄断奶仔猪525头,分成5组,每组105头,分别接种A、B、C、D和E五个厂家的PCV2疫苗.免疫前从每个组中挑选15头断奶仔猪,采血监测PCV2抗体,根据抗体结果再将小猪均衡调配至各疫苗组并标记为后续跟踪监测对象,于60、88、97、107、117、127、137、149、158和181 d龄进行采血监测PCV2感染情况.试验前称取并记录各组猪只的重量,试验期间记录猪只的死淘情况和饲料消耗量,试验后再次称重并计算日增重和料重比.结果显示:感染后各时间点血液PCV2抗原的阳性率整体上,疫苗D组＞疫苗A组＞疫苗E组＞疫苗B组＞疫苗C组;死淘率和料重比,疫苗C组＜各疫苗组;日增重,疫苗C组＞各疫苗组;疫苗C组猪只的血液PCV2抗原阳性率低、病毒血症维持时间短、死淘率低(8.57％)、日增重高(0.738 kg/d)、料重比低(2.644).说明疫苗C相较其他厂家的疫苗效果更好,更能有效防控PCV2d型毒株的感染.

语种： 中文

作者： 宋晓晴;邓瑞德;李欣;李姣;李润成;...

期刊： 畜牧兽医学报,2024年55(05):2072-2079 ISSN：0366-6964

作者机构： 湖南农业大学动物医学院,长沙 410128;[李姣] 湖南美神育种有限公司,株洲 412000;湖南省畜牧兽医研究所,长沙 410131;[葛猛; 邓瑞德; 李润成; 董伟; 李欣; 宋晓晴] 湖南农业大学;[杜丽飞] 湖南省畜牧兽医研究所

关键词： 猪圆环病毒4;原核表达;间接ELISA;血清流行病学调查

摘要： 旨在建立一种猪圆环病毒4（porcine circovirus type 4, PCV4）Cap蛋白间接ELISA抗体检测方法，对猪群中PCV4抗体进行检测，并与以往的关于PCV4血清流行病学的调查结果进行对比研究，从而更全面地了解PCV4在猪群中的感染和流行情况。本研究利用原核表达系统成功表达PCV4 Cap蛋白，对反应条件进行优化，建立了基于PCV4 Cap蛋白的间接ELISA方法。采用建立的ELISA方法对中国18个省份的不同阶段的2 298份猪血清样本进行检测，以调查中国猪群中PCV4的血清学流行情况。同时将Cap-ELISA检测方法与之前建立的Rep-ELISA进行对比，平行检测845份血清样本。结果显示，在18个省份中，17个省的血清样本中检测到PCV4抗体。PCV4总血清阳性率为34.94%,母猪和育肥猪阳性率分别为59.95%和31.64%,仔猪阳性率为21.14%,保育猪中检出的阳性率最低，为4.20%。两种方法共同检测845份血清样本，符合率为82.84%,其中Cap-ELISA检测总阳性率为31.83%,Rep-ELISA检测总阳性率为35.03%。研究表明，PCV4在中国广泛传播，不同年龄阶段的猪只均能感染。Cap-ELISA和Rep-ELISA两种方法一致性高，从抗体消长规律来分析，两种方法都说明猪群感染PCV4主要在育肥猪和母猪阶段。本研究提供了中国PCV4的最新血清流行病学特征和PCV4在不同阶段猪群中的感染情况，进一步证实了PCV4在我国猪群中有一定的感染率，其危害值得进一步研究和关注。

语种： 中文

作者： 胡泽奇;李润成;谭祖明;谢秀艳;王江平;...

期刊： 畜牧兽医学报,2024年55(05):2267-2272 ISSN：0366-6964

作者机构： 湖南农业大学动物医学院,长沙 410000;[谭祖明] 茶陵县畜牧水产事务中心,茶陵 412400;[秦乐娟; 王江平; 李荣] 湖南龙华农牧发展有限公司,茶陵 412400;[胡泽奇; 葛猛; 谢秀艳; 李润成] 湖南农业大学

关键词： 猪流行性腹泻病毒;猪A群轮状病毒;猪丁型冠状病毒;三重RT-qPCR

摘要： 旨在建立一种可快速同时检测猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus, PEDV）、猪A群轮状病毒（porcine rotavirus type A, PoRVA）和猪丁型冠状病毒（porcine deltacoronavirus, PDCoV）三重荧光定量PCR方法。针对PEDV-N、PoRVA-VP6和PDCoV-M基因设计了引物和探针，条件优化后进行性能评估，并与商品化试剂盒检测对比。结果显示：本研究建立的三重RT-qPCR方法具有良好特异性，对PRRSV、PCV2和PRV等阳性核酸不发生扩增；具有较高的敏感性，PEDV、PoRVA和PDCoV的最低检测限均达1 copies·μL-1;重复性良好，组内和组间变异系数均小于1%;样本适应性广，检测不同样本类型时，变异系数均小于1%。与商品化试剂盒对比，本研究建立的方法PEDV和PoRVA的检测符合率为92.5%和97.5%,并对PDCoV的检测范围更广，对其变异毒株仍有较好的检测效果。本研究建立的检测方法具有特异性好、敏感性高、稳定性强和样本适应性广等优势，为临床腹泻样本提供了一种好的检测方法。

语种： 中文

作者： 谢秀艳;李润成;秦乐娟;胡泽奇;黎满香

期刊： 湖南畜牧兽医,2024年(01):12-15 ISSN：1006-4907

作者机构： 湖南农业大学动物医学院,湖南长沙 410128;湖南龙华农牧发展有限公司 湖南株洲 412400;[胡泽奇; 谢秀艳; 李润成; 黎满香] 湖南农业大学;[秦乐娟] 湖南龙华农牧发展有限公司

关键词： 猪轮状病毒;流行毒株;感染情况;阳性率

摘要： 为调查猪场猪轮状病毒（PoRVA）流行毒株以及不同阶段猪群PoRVA感染情况，从某规模猪场收集PoRVA阳性样本进行VP7基因测序分析，同时采集不同阶段猪群粪便样本，采用荧光定量RT-PCR方法进行PoRVA检测，分析猪场不同阶段猪群PoRVA感染情况。结果发现：该规模猪场PoRVA流行毒株主要为G9型猪轮状病毒；各阶段猪群粪便样，其阳性率介于1.5%～42.09%，其中7～23日龄哺乳仔猪粪便样，阳性率为8.66%,24～65日龄保育猪粪便样，阳性率为42.09%，育肥猪阳性率为2.66%，母猪为1.5%；从24～42日龄临床正常（55.08%）与腹泻猪（36%）之间的PoRVA阳性率比较结果，没有发现腹泻与感染PoRVA存在相关性。

语种： 中文

作者： 徐舟;秦乐娟;胡泽奇;谢秀艳;尹德明;...

期刊： 湖南畜牧兽医,2024年(02):39-42 ISSN：1006-4907

作者机构： 湖南农业大学动物医学院,湖南长沙 410128;湖南龙华农牧发展有限公司,湖南株洲 412400;[胡泽奇; 徐舟; 谢秀艳; 李润成; 尹德明] 湖南农业大学;[秦乐娟] 湖南龙华农牧发展有限公司

关键词： 疫苗筛选;gB抗体;gE抗体

摘要： 摘 要:试验旨在筛选不同免疫效果的猪伪狂犬病病毒(PRV)疫苗,选取60日龄的健康仔猪60头,分成4组,分别接种A、B、C、D 4种PRV弱毒活疫苗,4种疫苗每头份所含病毒滴度从高到低排序为C、D、B、A,定期采血检测血清抗体(gB、gE)水平,以评估其免疫效果.结果表明:当保育猪的母源抗体S/N值高于0.90时,首次接种PRV活疫苗能产生抗体上升反应;在仔猪63、98和130日龄时,分别接种PRV活疫苗,C疫苗所产生gB抗体的效果比免疫A疫苗或B疫苗或D疫苗更好;针对生长育肥猪,最好选择接种3次PRV活疫苗,以确保猪只获得较为充分的保护.

语种： 中文

作者： 许文博;吴丽梅;刘鑫;李升;黄复深;...

期刊： 畜牧兽医学报,2022年53(6):1858-1869 ISSN：0366-6964

作者机构： [黄复深] 湖南农业大学动物医学院,长沙410128;[黄复深] 湖南农业大学,湖南兽药工程技术研究中心,长沙410128;[刘鑫; 吴丽梅; 李润成; 许文博; 李升] 湖南农业大学

关键词： 多杀性巴氏杆菌CS株;全基因组序列;致病基因组学;基因多态性

摘要： 通过对多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)CS株全基因组的毒力基因分析,以期从基因组角度了解P.multocida CS的致病性机理。常规方法分离细菌,并进行毒力鉴定。基于二代测序平台对P.multocida CS进行测序,应用比较基因组学方法将其与GenBank中具全基因组来源于不同地域和宿主的P.multocida基因组进行比较分析。结果显示:猪肺疫病料中分离细菌滴鼻感染小鼠,测得其LD_(50)为5×10~2 CFU·mL~(-1),显示较强毒性。将测序后的P.multocida CS株全基因组信息提交至NCBI,获得登录号SUB11119617。通过对P.multocida CS全基因组序列的分析表明,P.multocida CS株全基因组大小为2 599 048bp,G+C含量为39.932%,编码CDs为2 580个,占整个基因组长度的69.6%,编码CDs的平均长度为952bp。此外还有53个tRNA基因和3个rRNA基因。有87.95%的编码CDs可进行COGs功能分类,29个为功能未知基因。利用RaAXML的最大释然法(maximum likelihood,ML)进行系统进化分析发现,P.multocida CS株与1个猪源性、2个牛源血清A型毒株,和1个猪源性D型毒株有较近的亲缘关系。P.multocida CS株含254个毒力相关基因,分为4大类11小类。其中铁摄取系统、黏附系统、分泌系统和双组分调控系统相关的多个基因在不同的毒株(包括血清型)的分布存在多态性。通过对基因出现频率的分析发现,铁摄取系统相关的tbpA和铁复合物外膜受体蛋白基因(iron complex outer membrane receptor protein gene,irp)以及黏附的相关的ppdD和ompA基因在血清A型出现的频率较高,这是否与不同菌株的毒力差异相关有待进一步证实。P.multocida CS的分泌系统由Ⅰ型(hly基因)、Tat型、Sec- SRP型3种类型组成。其中,hlyD基因在不同的血清型的分布频率存在多态性。P.multocidaCS株的双组分信号转导系统(TCSs)由16个调节相关基因,12个感应相关基因和2个有hybrid相关基因。这些基因在不同血清型分布的多态性与不同菌株毒力的关系有待进一步研究。综上所述,组成铁摄取系统、黏附系统、分泌系统和双组分调控系统的基因在不同的血清以及同一血清型内出现频率存在多态性,它们与P.multocida菌株毒力强弱的关系有待进一步研究。

语种： 中文

作者： 谢怡灵;李润成;赵墩;杜丽飞;熊梦霞;...

期刊： 中国动物传染病学报,2021年29(03):34-41 ISSN：1674-6422

作者机构： [葛猛; 黎满香; 赵墩; 熊梦霞; 李润成; 李双寅; 宁柯铭; 谢怡灵] 湖南农业大学动物医学院;湖南省畜牧兽医研究所;湖南鑫广安农牧股份有限公司;[杜丽飞] 湖南省畜牧兽医研究所<&wdkj&>湖南鑫广安农牧股份有限公司

关键词： 猪圆环病毒3;Cap蛋白;间接ELISA

摘要： 本研究将猪圆环病毒3型（PCV3）Cap蛋白截去核定位序列（NLS）后对应的dCap基因克隆至pET28a（+）并转入大肠杆菌BL21（DE3）,得到重组菌后进行蛋白表达。采用镍离子亲和层析纯化dCap蛋白。将纯化的dCap蛋白作为抗原进行包被,建立检测PCV3抗体的间接ELISA方法,并对湖南省1175份临床血清进行检测。结果显示:dCap蛋白主要以包涵体形式表达,当以pH为10.83的碳酸盐缓冲液将纯化的dCap蛋白稀释到0.2 μg/mL并进行包被,且血清50倍稀释,酶标二抗1∶8000稀释时,ELISA的反应条件最佳,确定S/P临界值为0.270,批内及批间差异均小于10%,本方法与PCV2、CSFV、PRV和PRRSV阳性血清无交叉反应。对湖南省11个地级市的29个猪场的血清流行病学调查结果表明:PCV3抗体猪场阳性率为100%（29/29）,样品总阳性率为58.64%（689/1175）,但阳性样品主要集中在肥猪和母猪,且阳性率在肥猪阶段明显上升,说明猪群感染PCV3主要是在育肥阶段。

语种： 中文

作者： Li, Run Cheng;Fang, Chao;Luo, Wei;Ge, Meng;Hu, Yu Li;...

期刊： MEDYCYNA WETERYNARYJNA-VETERINARY MEDICINE-SCIENCE AND PRACTICE,2020年76(8):446-450 ISSN：0025-8628

通讯作者： Yu, Xing Long

作者机构： [Qing, Ren Ke; Hu, Yu Li; Fang, Chao; Ge, Meng; Zhao, Dun; Yu, Xing Long; Li, Run Cheng] Hunan Agr Univ, Coll Vet Med, Changsha, Peoples R China.;[Luo, Wei] Huaihua Vocat & Tech Coll, Huaihua, Peoples R China.

通讯机构： [Yu, Xing Long] H;Hunan Agr Univ, Coll Vet Med, Changsha, Peoples R China.

关键词： capsular types;LPS genotypes;P multocida;virulence-associated genes

摘要： Pasteurella multocida (P. multocida), an opportunistic zoonotic pathogen associated with high morbidity and mortality in livestock, shows significant temporal and geographical variation in its serotype distributions and phenotypic characteristics. The aim of this study was To investigate capsular types, lipopolysaccharide (LPS) genotypes, and virulence-associated genes of P. multocida strains isolated from pigs. A total of 801 samples (lungs, tonsils, nasal swabs) were collected from slaughterhouses and various regions of the Hunan province. P. multocida strains were isolated from various samples, classified, and virulence-associated genes were detected by polymerase chain reaction (PCR). 124/7 multocida strains were assigned to six groups based on both capsular type and LPS genotype, namely A: L3 (capsular type A and LPS genotype 3,64/124); A: L6 (16/124); D: L6 (38/124); F: L3 (4/124); L3 (1/124) and 1 untypable strain. Of the 23 virulence-associated genes investigated in this study, 14 were highly expressed in 98% to 100% of the 124 strains. While tbpA was undetectable in any of the isolated strains, hsf-1, pfhA, tadD, toxA, pmHAS, hgbA, hgbB, and nanB showed differential distribution among the strain groups. Interestingly, pfhA (Mutation or inactivation of pfhA was reported to decrease the virulence of P. multocida) was found in 46% of group A: L3 strains and in 100% of group F: L3 strains, but not found in other groups. Further investigation is needed to determine whether strains in group A: L3 show greater virulence than the A: L6 P. multocida strains. © 2020 Polskie Towarzystwo Nauk Weterynaryjnych. All rights reserved.

语种： 英文

作者： 李熙;张古月;龙剑;李润成

期刊： 中国动物保健,2020年22(4):65-66 ISSN：1008-4754

作者机构： [李熙] 长沙市农业综合行政执法局;湖南农业大学动物医学院;[龙剑; 李润成; 张古月] 湖南农业大学

关键词： 肉鸡;鸡毒支原体;检测;分析

摘要： 本文对一规模鸡场50日龄左右的肉鸡突然出现眼睛流泪、失明,甚至死亡的疫情进行了细菌分离鉴定和鸡毒支原体的PCR检测。结果证明鸡群存在鸡毒支原体感染,测定感染菌株脂蛋白基因与2016年提交来自我国鸡肺脏的菌株QHDT-1具有100%的同源性。采取降低鸡群密度,饮水中添加3天多西环素后再添加4天泰万菌素的措施,及时控制了疫病的发展,最后就对该病的防控进行了分析讨论。

语种： 中文

作者： 李润成;张古月;龙剑

期刊： 中国兽医杂志,2020年56(11):69-70+117 ISSN：0529-6005

作者机构： 湖南农业大学动物医学院,湖南长沙410128;[龙剑; 李润成; 张古月] 湖南农业大学

摘要： 公鸡经阉割后,不仅长得更快、长得更大,而且肉质更好,为此,中小型养鸡户常请外来技术人员对公鸡进行阉割手术.通常情况下是按阉鸡的数量计算劳动报酬,时有技术人员为尽可能的增加每天阉鸡的数量,提高劳动所得,盲目追求速度,导致阉割消毒不严、操作粗暴等问题,如果再加上阉割前后鸡场管理不够精细,容易出现公鸡在阉割后大量死亡的情况. 2019年7月,衡阳某鸡场请3名技术人员在1.5 d时间内阉割了约5 000羽公鸡,阉割前未给鸡群投喂抗应激的药物,且鸡群密度较大,阉割后80％的鸡表现阉割处皮下鼓气.结果,阉割后的7 d内,每天死亡100多羽,先后饲喂环丙沙星、新霉素、阿米卡星等无明显效果,20 d内共死亡1 200多羽,死亡率达到24％以上.鸡群中少量未经阉割的公鸡及少量母鸡没有异常表现.本文收集死亡的阉割鸡进行了临床解剖观察和实验室检测分析,报告如下.

语种： 中文

作者： 廖华媛;张古月;龙剑;李润成

期刊： 养殖与饲料,2020年(5):97-100 ISSN：1671-427X

作者机构： 湖南农业大学动物医学院,长沙 410128;[龙剑; 廖华媛; 李润成; 张古月] 湖南农业大学

关键词： 肉鸡群;大肠杆菌;诊断;药物敏感性;防控

摘要： 为有效防控某鸡场70日龄肉鸡出现发病死亡的情况,对发病鸡群进行临床诊断、细菌分离及PCR鉴定以确定病原体;对分离菌进行药物敏感性检测以确定病鸡药物治疗方案。结果表明:鸡群存在大肠杆菌感染;分离菌对人用庆大霉素、新霉素、多粘菌素B、阿米卡星、头孢曲松比较敏感,对人用阿莫西林不敏感,对鸡场提供的兽药庆大霉素不敏感,对兽用阿莫西林克拉维酸钾、头孢噻呋钠、硫酸新霉素、硫酸阿米卡星敏感;通过使用敏感兽用抗菌药物并提高鸡舍温度、更换新的垫料成功控制了发病情况。说明兽医在进行细菌药物敏感性评价时,用人用药敏纸片和商品化的兽药得出的结果可能存在明显差异,同时也说明了使用药物的同时结合改善环境对于成功防控鸡群大肠杆菌感染具有重要的作用。

语种： 中文

作者： 龙剑;罗灵芝;张古月;尹德明;李润成

期刊： 养猪,2020年(04):97-100 ISSN：1002-1957

作者机构： 湖南农业大学动物医学院,湖南 长沙 410128;[龙剑; 李润成; 罗灵芝; 张古月; 尹德明] 湖南农业大学

关键词： 仔猪;停乳链球菌类马亚种;分离鉴定;药敏检测;致病性

摘要： 2019年7月,湖南郴州某猪场少量仔猪出现关节肿大、跛行症状。为确定其发病原因,试验无菌取仔猪实质脏器和关节液,进行细菌分离培养、优势菌形态及培养特性观察、生化特性测定、16S rRNA基因序列分析、药物敏感性检测及小鼠致病性试验。结果:该优势菌为革兰氏阳性球菌;生化特性与停乳链球菌类马亚种一致;16S rRNA基因序列比对及系统发育树结果显示,与停乳链球菌类马亚种AB.537922.1(Japan)100%同源性,因此,鉴定为停乳链球菌类马亚种,命名为CZ1907株;药敏试验检测结果表明,CZ1907株对青霉素、氨苄西林、阿莫西林、头孢曲松、头孢噻肟、氟苯尼考、恩诺沙星、万古霉素高度敏感,对呋喃唑酮、红霉素中度敏感,而对大观霉素、庆大霉素、多西环素、四环素、复方新诺明、林可霉素耐药;小鼠致病性试验结果表明,该菌具有较强致病力,对21~23 g ICR小鼠的半数致死剂量为1.11×108 CFU。该研究报道为湖南省猪源停乳链球菌感染情况补充了数据资料。

语种： 中文

作者： 张古月;罗灵芝;龙剑;谢怡灵;廖荣莉;...

期刊： 中国动物检疫,2020年37(2):71-76 ISSN：1005-944X

作者机构： 湖南农业大学动物医学院,湖南长沙 410128;[龙剑; 廖荣莉; 李润成; 谢怡灵; 罗灵芝; 张古月] 湖南农业大学

关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒;猪圆环病毒2型;细菌;混合感染;诊断;防控措施

摘要： 湖南省某规模猪场的保育猪在转至育肥舍10 d后(约80日龄)陆续出现发病死亡情况.为确诊病情,查找病因,采集不同年龄段的猪血清进行猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、圆环病毒2型(PCV2)抗体检测,同时对4头发病猪进行剖检观察,并采集病料进行CSFV、PRRSV、PCV2病原检测以及细菌分离、药敏分析.结果显示:疫病发生前后的生猪CSFV抗体均不理想,无高抗体水平个体出现,但病原检测为阴性;生猪PRRSV、PCV2抗体整体上均经历了母源抗体下降、发病时抗体又上升的阶段,且病原检测均有阳性样本存在;在病料中分离到葡萄球菌、链球菌、副猪嗜血杆菌.由此推断,该次生猪发病原因可能为PRRSV、PCV2以及多种细菌的混合感染.结合病因推测,制定了防治方案,并有效控制了病情,也验证了此次发病的原因推断.本起疫情的诊断和防治为猪场多病原混合感染防控提供了参考,也提示规模猪场需要开展疫病的综合防控.

语种： 中文

作者： 李润成

期刊： 今日养猪业,2020年(02):31-34 ISSN：1673-8977

作者机构： 湖南农业大学动物医学院;[李润成] 湖南农业大学

关键词： 非洲猪瘟;猪场环境;感官分析;非特异性免疫力;猪舍温度;猪群结构;易感性

摘要： “日常感官分析”主要是指猪场工作人员以降低生猪对病原的群体易感性(指一个生猪群体作为整体对某种病原体的易感染程度,群体中易感个体所占的百分率,直接影响到传染病是否会造成流行以及疫病流行的严重程度)为目的,通过眼、耳、鼻等对外界具有感官分析功能的器官,对生猪以及生猪所处的环境进行分析,并通过大脑的相关知识储备进行加工处理,然后对生猪所处的环境做出及时的调控.当前,针对非洲猪瘟病毒(ASFV)没有经验证有效的疫苗可用,也没有特效的治疗药物可选,做好生物安全,不让生猪接触病毒已经成为大小养殖场公认的防控途径.对于生物安全,目前已有不少的经验和做法,关键在于执行.但维持生猪非特异性免疫力,降低猪群的群体易感性,目前不少猪场的重视度尚不够,或没有明确的途径来执行.

语种： 中文

作者： 任杰;葛猛;李润成;郑金;凌同;...

期刊： 中国兽医学报,2020年40(03):450-456 ISSN：1005-4545

作者机构： 湖南农业大学动物医学院,湖南长沙410128;湖南中岸生物药业有限公司工程技术中心,湖南长沙410100;[凌同] 湖南中岸生物药业有限公司;[任杰; 葛猛; 李润成; 黎满香; 郑金; 李岱霞; 余兴龙; 张磊] 湖南农业大学

关键词： 猪瘟病毒;Erns蛋白;杆状病毒表达系统;抗体;间接ELISA

摘要： 将人工合成的CSFV E~(rns)基因插入到pFastBac1获得重组转移载体pFastBac1-E~(rns),在DH10Bac大肠杆菌中转座后提取杆粒并转染Sf9细胞,用获得的重组杆状病毒感染High Five细胞表达E~(rns)蛋白并通过亲和层析进行纯化。以纯化后E~(rns)蛋白作为诊断抗原,通过摸索抗原包被量和抗体血清稀释倍数等条件,建立检测CSFV E~(rns)抗体的间接ELISA方法(E~(rns)-iELISA)。结果显示,E~(rns)蛋白得到有效表达,相对分子质量约为35 000;确定的ELISA抗原包被量为120ng/孔、血清稀释100倍,酶标二抗稀释6 000倍,封闭条件为37℃30min,TMB底物作用15 min,临界值为0.329。用E~(rns)-iELISA方法检测92份阴性血清,其特异性为88.04%,与猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸系统综合征病毒和猪流行性腹泻病毒阳性血清均无交叉反应;对171份阳性血清的敏感性为92.98%;批内和批间重复的平均变异系数为7.4%和10.74%。结果表明,本试验所建立的E~(rns)-iELISA方法重复性好,具有较高的检测特异性,且对CSFV疫苗毒和国内流行毒株都具有较高的检测敏感性,具有潜在的开发和应用价值。

语种： 中文

作者： Gui, Bin-Ze;Lv, Qiu-Yan;Ge, Meng;Li, Run-Cheng;Zhu, Xing-Quan;...

期刊： Transboundary and Emerging Diseases,2020年67(1):29-32 ISSN：1865-1674

通讯作者： Liu, Guo-Hua

作者机构： [Gui, Bin-Ze; Ge, Meng; Liu, Guo-Hua; Li, Run-Cheng; Lv, Qiu-Yan] Hunan Agr Univ, Coll Vet Med, Changsha 410128, Hunan, Peoples R China.;[Ge, Meng; Liu, Guo-Hua; Li, Run-Cheng] Hunan Coinnovat Ctr Anim Prod Safety, Changsha, Hunan, Peoples R China.;[Zhu, Xing-Quan] Chinese Acad Agr Sci, Lanzhou Vet Res Inst, State Key Lab Vet Etiol Biol, Key Lab Vet Parasitol Gansu Prov, Lanzhou, Gansu, Peoples R China.

通讯机构： [Liu, Guo-Hua] H;Hunan Agr Univ, Coll Vet Med, Changsha 410128, Hunan, Peoples R China.

关键词： China;Neospora caninum;nested PCR;pigs;seroprevalence

摘要： Neospora caninum is a protozoan parasite which can infect many mammals and birds with a worldwide distribution. However, no molecular data are available about the occurrence of N. caninum in pigs. In this study, the serological and molecular prevalence of N. caninum infection in farmed pigs were investigated in Hunan province, China, between January 2017 and December 2018. A total of 1,500 serum samples collected from 10 herds in Hunan province were evaluated using a competitive-inhibition enzyme-linked immunoassay assay (cELISA). The overall seroprevalence of N. caninum in the examined pigs was 1.9%. The seroprevalence of N. caninum ranged from 0.3% to 4.6% among different regions in Hunan province of China (p < .05). DNA was extracted from brain samples, and the Nc-5 gene and ITS-1 region were amplified and then sequenced. Three (0.5%) of the examined 600 brain tissues were found to contain N. caninum DNA. Our phylogenetic analyses indicated that N. caninum samples were classified into two distinct groups. Although the prevalence is low within the pig groups investigated, our results revealed the emergence of N. caninum infection in pigs in China. The finding of the present study provides molecular evidence that the pigs are the natural intermediate host of N. caninum and may have major epidemiological importance.

语种： 英文

作者： 廖华媛;熊梦霞;李润成

期刊： 湖北农业科学,2020年(22):86-90+96 ISSN：0439-8114

作者机构： 湖南农业大学动物医学院

关键词： 孔雀石绿;阴沟肠杆菌（Enterobacter cloacae）;毒性测试;脱色条件

摘要： 从土壤来源的细菌中,筛选可使孔雀石绿（MG）脱色的菌株,结果得到1株阴沟肠杆菌（Enterobacter cloacae）（S1-2）对MG有较强的脱色能力。通过MG被脱色前后溶液吸光度的变化衡量脱色率,用单一变量法分析影响菌株S1-2发挥MG脱色作用的不同条件。结果表明,菌株S1-2在36 h内可使1 100 mg/L的MG完全脱色,处理后的MG对解淀粉芽孢杆菌、壁芽孢杆菌抑制率降低了43.98%～48.21%。用300 mg/L的MG进行脱色条件分析发现,按0.5%～7.0%接菌,脱色率达91.67%～93.91%;不同pH培养环境中,该菌在pH 6、7时对MG脱色率为90.02%～94.54%;在20～40℃条件下培养,该菌对MG脱色率达84.61%～94.56%;在6～18 g/L的NaCl浓度下,该菌对MG的脱色率达91.85%～93.77%。

语种： 中文

作者： 罗烨;罗灵芝;丁彦彬;赵墩;周小飞;...

期刊： 中国兽医科学,2020年50(11):1341-1347 ISSN：1673-4696

作者机构： 湖南农业大学动物医学院;[郑金] 湖南康保特生物科技有限公司;[周小飞; 罗烨; 葛猛; 丁彦彬; 李润成; 罗灵芝; 余兴龙; 赵墩] 湖南农业大学

关键词： 猪流行性腹泻病毒;S1蛋白;ST细胞;间接ELISA

摘要： 根据猪流行性腹泻病毒(PEDV)HuN株S1蛋白的基因序列(GenBank:JQ517274)构建哺乳动物细胞重组表达质粒pIRES-S1。利用电转法将pIRES-S1转染至ST细胞,经过G418加压筛选、Western-blot检测、悬浮驯化后,得到能表达S1蛋白的ST稳转细胞池。Western-blot结果显示,S1蛋白具有良好的反应原性。以S1蛋白作为包被抗原初步建立间接ELISA方法,并对PEDV临床血清和进口种猪PEDV阴性血清进行检测,以血清中和试验为标准,结果显示,该ELISA方法敏感性为96.3%,特异性为97.7%,与血清中和试验具有很高的一致性(kappa值=0.882,P<0.05)。应用ELISA方法对PEDV返饲猪跟踪血清检测,结果显示,该方法能准确地评估感染猪体内PEDV IgG抗体水平消长规律。上述结果表明,本研究建立的基于S1蛋白的ELISA方法具有高敏感性和高特异性,可用于临床猪血清中PEDV抗体的检测,为猪群PEDV的免疫评估提供有效依据。

语种： 中文

作者： Li, Runcheng;Hu, Yuli;Ge, Meng;Zhao, Dun;Yang, Taotao;...

期刊： MEDYCYNA WETERYNARYJNA-VETERINARY MEDICINE-SCIENCE AND PRACTICE,2019年75(3):175-178 ISSN：0025-8628

通讯作者： Yu, Xinglong

作者机构： [Li, Runcheng; Ge, Meng; Zhao, Dun; Yu, Xinglong; Hu, Yuli; Yang, Taotao; Qing, Renke] Hunan Agr Univ, Coll Vet Med, Changsha, Hunan, Peoples R China.

通讯机构： [Yu, Xinglong] H;Hunan Agr Univ, Coll Vet Med, Changsha, Hunan, Peoples R China.

关键词： slaughter pigs;bronchoalveolar lavage fluid;Mycoplasma hyopneumoniae;seasons;China

摘要： The purpose of this study was to analyze the correlation of the rate of Mycoplasma hyopneumoniae (M. hyo) in slaughter pigs with season, climate change and enzootic pneumonia (EP) lesions. We collected 530 slaughter pig lungs with suspected lesions from two slaughterhouses in different seasons and weather conditions from November 2014 to March 2017 in Changsha Hunan Province, China. The EP lesions of these lungs were quantified, and a PCR analysis was used to detect M. hyo in samples of bronchoalveolar lavage fluid (BALF). Twenty percent, 10%, and 9% of the lung specimens were scored 1-5,6-10, and > 11, respectively. Additionally, we found that 36% of all BALF samples tested positive for M. hyo. Among the lung specimens collected in winter, 41% scored 1 or more, and 53% tested positive for M. hyo. With respect to seasons, the lung specimens collected in summer showed the least number of EP lesions and the lowest positive testing rate for M. hyo. Of these specimens, 27% scored 1 or more, and 22% tested positive for M. hyo. Additionally, low temperature and fast temperature change (during 10 days before sampling) were associated with a higher rate of M. hyo detection in BALF. There was a positive correlation between the lung EP lesion score and the detection rate of M. hyo in the BALF of slaughter pigs. In conclusion, lung EP lesion scoring in slaughter pigs is of referential value to the evaluation of the dynamics of M. hyo infection in a swine population. It is essential to control the spread of M. hyo by careful management of swine populations, and the prevention and control of M. hyo in fattening pigs is of great significance to the eradication of the disease. © 2019 Medycyna Weterynaryjna. All rights reserved.

语种： 英文

作者： 姚清;李润成;卿任科;廖华媛;余兴龙

期刊： 养猪,2019年(3):113-115 ISSN：1002-1957

作者机构： 湖南农业大学动物医学院,湖南 长沙,410128;[廖华媛; 李润成; 卿任科; 姚清; 余兴龙] 湖南农业大学

关键词： 猪链球菌;病猪;血清型

摘要： 为了解猪链球菌病在湖南病猪群中不同血清型的流行情况,实验室于2015—2017年从湖南省部分病猪群中收集到疑似链球菌感染病料142份,分别进行细菌分离,并采用猪链球菌GDH特异性引物鉴定到106株猪链球菌,阳性率为74.65%（106/142）。然后采用猪链球菌33个血清型的特异性引物对这106个菌株进行PCR鉴定,结果 86.79%的菌株被鉴定到具体血清型,其中优势血清型为2型（1/2型）30.19%,其次是7型（11.32%）、8型（9.43%）和3型（6.60%）。

语种： 中文