作者： 李玉娟;肖宁;贾文丹;李霞荣;郑晓峰;...

期刊： 畜牧兽医学报,2022年53(3):938-946 ISSN：0366-6964

作者机构： [李玉娟] 湖南农业大学动物医学院,湖南省兽药工程技术研究中心,长沙410128;[李玉娟] 湘南学院基础医学院,郴州423000;[贾文丹; 肖宁; 郑晓峰; 李霞荣; 孙志良] 湖南农业大学

关键词： 钩吻;氟马西尼;肾上腺素;毒性机制;GABAA受体

摘要： 旨在研究氟马西尼联合肾上腺素对钩吻中毒大鼠的解救效果,并验证钩吻可能的毒性作用靶点,为钩吻中毒机制探讨及解救钩吻中毒病例提供参考。构建钩吻大鼠中毒模型,将60只大鼠随机分为4组,分别为对照组、氟马西尼解救组、肾上腺素解救组、联合用药(氟马西尼+肾上腺素)解救组,记录各组大鼠中毒及死亡情况,并监测各组大鼠血压、心率,评价各组药物的解救效果。采用分子对接、全细胞膜片钳技术,预测钩吻主要毒性物质钩吻素己与解救药物作用的靶点,阐释其可能的解毒机制。结果显示:钩吻灌胃大鼠的半数致死量(LD_(50))为0.25g·kg~(-1),氟马西尼联合肾上腺素使用时对钩吻中毒的大鼠有显著的解救效果,存活率由25%提高到92% (P<0.01),且平均中毒症状出现时间由16.56min延长至25.98min(P<0.01),平均死亡时间由40.13min延长至58.05min(P<0.01),解救效果显著高于氟马西尼和肾上腺素单独解救组。联合用药组还可显著缓解中毒所致的大鼠血压、心率下降的临床表征。分子对接计算机模拟结果显示,氟马西尼与钩吻素己都与GABAA受体同一活性位点有较好的结合效果,且氟马西尼的结合能-85.47kJ·mol~(-1),强于钩吻素己结合能-77.15kJ·mol~(-1)。全细胞膜片钳结果显示,钩吻素己可显著延长GABAA受体离子通道的开放时间,而氟马西尼可拮抗此作用。综上所述,氟马西尼和肾上腺素联合使用对钩吻中毒大鼠具有明显的解救效果,钩吻神经毒性靶点与氟马西尼作用的GABAA受体密切相关,肾上腺素对调节中毒所致的血压下降起到关键作用,联合用药可起到标本兼治效果。

语种： 中文

作者： 王吉;刘翔燕;李晓文;李荣芳;文利新

期刊： 畜牧兽医学报,2022年53(12):4159-4171 ISSN：0366-6964

作者机构： [王吉; 文利新] 湖南农业大学动物医学院,畜禽保健湖南省工程研究中心,长沙410128;[王吉] 湖南农业大学动物科学技术学院,长沙410128;[王吉] 长沙绿叶生物科技有限公司,长沙410100;[文利新] 湖南省畜禽安全生产协同创新中心,长沙410128;[李荣芳; 李晓文; 刘翔燕] 湖南农业大学

关键词： 母羊生殖应激;生殖应激综合征;妊娠毒血症;母羊代谢紊乱;母羊

摘要： 母羊的生殖应激主要包括母羊主动应激、母羊被动应激以及胎羊宫内应激。适当的生殖应激是正常发情、维持妊娠、发动分娩、顺利哺乳的重要生理基础。但长期或过度的生殖应激，将引起母羊代谢紊乱、免疫功能损害、生殖障碍以及胎羊或羔羊发育受阻等，这一系列能造成母体健康损害的疾病和临床表现，被定义为“母羊生殖应激综合征”。本文对母羊生殖应激及母羊生殖应激综合征进行了定义，并对生殖应激理论的综合临床应用进行了探讨，为预防和治疗生殖疾病（如妊娠期毒血症、产后乏力、子宫内膜炎等）提供了理论依据。

语种： 中文

作者： 贾金美;冯建豪;阳美霞;张羽芳;张虹亮;...

期刊： 畜牧兽医学报,2022年53(4):1133-1142 ISSN：0366-6964

作者机构： [阳美霞; 张虹亮; 冯建豪; 张羽芳; 王水莲; 贾金美] 湖南农业大学动物医学院

关键词： 猪;卵母细胞;体外成熟

摘要： 旨在研究RFRP-3对猪卵母细胞体外成熟的影响。本研究采用从屠宰场收集健康母猪的卵巢中挑取的GV期卵母细胞,随机分为3组,在培养基中分别添加0、10-6和10-8 mol·L~(-1)RFRP-3培养猪卵母细胞44h后统计各组卵母细胞的成熟率;在后续试验中将收集到的卵母细胞随机分为2组,在培养基中分别添加0和10-8 mol·L~(-1)RFRP-3培养猪卵母细胞44h,观察猪卵母细胞的卵丘扩展情况并计算各组的卵丘扩展指数和各组卵母细胞的成熟率;利用qRT-PCR检测卵丘扩展因子(PTGS2、HAS2、PTX3)、卵母细胞分泌因子(GDF9、 BMP15)和周期蛋白相关基因(CCNB1和CDK1)的表达变化;利用ELISA试剂盒检测MPF和cAMP的含量;采用放射免疫法检测孕酮和雌激素的浓度,每组卵母细胞量不少于100枚,每个试验重复3次。结果表明,与对照组相比,添加10-8 mol·L~(-1)RFRP-3培养猪卵母细胞可极显著降低卵母细胞的成熟率(P<0.01);通过显微镜观察并计算卵丘扩展指数发现,试验组中卵丘扩展无明显变化(P>0.05),但卵丘扩展因子(PTGS2、HAS2、PTX3)的表达极显著下降(P<0.01);RFRP-3可以极显著降低猪卵母细胞MPF的含量(P<0.01),对cAMP的含量无显著影响(P>0.05);添加RFRP-3可促进GDF9(P<0.01)和BMP15(P<0.05)的表达,抑制CCNB1(P<0.05)和CDK1(P<0.05)的表达;同时试验组培养基中孕酮、雌激素的浓度也极显著下降(P<0.01)。综上,RFRP-3通过调控猪卵母细胞成熟相关因子和卵丘扩展因子的表达以及类固醇激素的分泌,从而抑制卵母细胞的体外成熟。本研究为阐明RFRP-3对哺乳动物卵母细胞的调控作用奠定理论基础。

语种： 中文

作者： 秦艺文;雷昕诺;王东亮;杨文兵;雷波;...

期刊： 中国兽医科学,2022年52(2):205-213 ISSN：1673-4696

作者机构： [秦艺文; 雷昕诺; 王东亮; 杨文兵; 雷波; 余婉婷; 王乃东] 湖南农业大学动物医学院兽用蛋白质工程疫苗湖南省重点实验室兽用疫苗逆向创制湖南省工程研究中心

关键词： 猪流行性腹泻病毒(PEDV);结构蛋白;重组杆状病毒;Sf9细胞;病毒样颗粒

摘要： 为在昆虫细胞中表达猪流行性腹泻病毒（PEDV）的S和M蛋白，并探讨S和M蛋白能否自动组装成病毒样颗粒（VLPs）分泌至培养基中，本研究构建了3种不同的重组质粒（pFastBac-S、pFastBac-M和pFastBac-S-M），转化入DH10Bac感受态细胞，经蓝白斑筛选及PCR鉴定获得重组Bacmid，通过转染昆虫细胞Sf9获得重组杆状病毒（BV-S、BV-M 和BV-S-M）。在悬浮培养的昆虫细胞Sf9中进行表达，表达分泌的上清通过蔗糖梯度离心进行浓缩纯化，最终获得分泌型的S-M VLPs。通过Western-blotting分析S和M蛋白的表达和分泌特性，透射电镜观察VLPs形态，间接ELISA检测VLPs与猪PEDV阳性血清的反应性，最后免疫小鼠后检验其免疫原性。结果显示，S和M蛋白均能以单独或共表达的形式（S-M）分泌至培养基中。电镜下可观察到由S-M蛋白形成的直径约为90～190 nm的VLPs。间接ELISA结果显示，S、M和S-M蛋白可与PEDV猪阳性血清发生特异性反应，免疫小鼠3次后可产生高水平特异性IgG抗体。以上结果表明，在Sf9昆虫细胞中共表达S和M蛋白可以获得分泌型S-M VLPs，并具有良好的免疫原性。

语种： 中文

作者： Song, Shikai;He, Wenjuan;Yang, Dawei;Benmouffok, Manar;Wang, Yao;...

期刊： 工程,2022年10(3):146-154 ISSN：2095-8099

通讯作者： Wang, Yang(wangyang@cau.edu.cn)

作者机构： [Benmouffok, Manar; Wu, Congming; Sun, Chengtao; Ma, Shizhen; Song, Shikai; He, Wenjuan; Wang, Yao; Wang, Yang; Ding, Shuangyang; Shen, Zhangqi; Song, Xiangbin] China Agr Univ, Coll Vet Med, Beijing Key Lab Detect Technol Anim Derived Food S, Beijing 100193, Peoples R China.;[Yang, Dawei] China Inst Vet Drug Control, Beijing 100081, Peoples R China.;[Li, Jiyun] Hunan Agr Univ, Coll Vet Med, Changsha 410125, Peoples R China.;[Cai, Chang] Murdoch Univ, Res & Innovat Off, Murdoch 6150, Australia.;[Cai, Chang] Zhejiang Agr & Forestry Univ, Coll Anim Sci & Technol, China Australia Joint Lab Anim Hlth Big Data Analy, Hangzhou 311300, Peoples R China.

通讯机构： [Yang Wang] B;Beijing Key Laboratory of Detection Technology for Animal-Derived Food Safety, College of Veterinary Medicine, China Agricultural University, Beijing 100193, China

关键词： Clinical mastitis;Klebsiella pneumonia;Molecular characteristics;Population structure;Antimicrobial resistance

摘要： Klebsiella pneumoniae (K. pneumonia, KpI) is a predominate inducement of bovine mastitis, which is associated with high mortality and milk yield reduction. However, data is lacking on the molecular characteristics of bovine K. pneumoniae, limiting the risk assessment of its transmission through the food chain. Herein, we investigated the prevalence of K. pneumoniae in 6301 clinical mastitis (CM) milk samples from dairy cattle in northern area of China. In total, 183 K. pneumoniae isolates were recovered, with detection rates of 3.0% and 2.8% in 2018 and 2019, respectively. Like human clinical K. pneumoniae, all CM K. pneumoniae isolates belonged to one of three phylogroups: KpI (n = 143), Klebsiella. quasipneumoniae subsp. similipneumoniae (KpII-B) (n = 37), and Klebsiella variicola (KpIII) (n = 3). We detected the extended-spectrum β-lactamase-encoding genes blaSHV-2a, blaCTX-M-14, and blaCTX-M-15, as well as clpC, lpfA, lacI, lacZ, lacY, and the fecABDEIR operon in the KpI isolates, which may contribute to their pathogenicity and host adaptability in cows. The high prevalence of KpI in dairy farms may be problematic, as it showed relatively higher rates of antibiotic resistance and virulence gene carriage than the KpII-B and KpIII isolates. Furthermore, we observed distinct differences in population structure between CM- and human infection-associated KpI isolates, with the genes associated with invasive infection in humans rarely being observed in bovine isolates, indicating that few CM-associated K. pneumoniae isolates pose a threat to human health. Nevertheless, bovine KpII-B isolates shared a high level of nucleotide sequence identity with isolates from human infections and frequently carried the nitrogen-fixation gene nif, suggesting an association between KpII-B isolates from cattle and humans, and plant-derived bacteria. © 2022

语种： 英文

作者： 何庆;李周勉;王欢;李丹彤;谭庆辉;...

期刊： 畜牧兽医学报,2022年53(5):1527-1535 ISSN：0366-6964

作者机构： [李周勉; 杨毅; 邓治邦; 李丹彤; 苏建明; 何庆; 邹亚文; 王乃东] 湖南农业大学动物医学院兽用蛋白质工程疫苗湖南省重点实验室兽用疫苗逆向创制湖南省工程研究中心;长沙市望城区高塘岭街道农业农村综合服务中心;[谭庆辉] 娄底市动物疫病预防控制中心

关键词： 猪圆环病毒3型;全基因组;遗传演化分析

摘要： 为分析猪流产胎儿中猪圆环病毒3型（porcine circovirus type 3，PCV3）的感染及其遗传进化情况。对2015—2017年采集的湖南省680份猪流产胎儿病料样品进行PCV3检测、扩增和测序，并利用生物信息学软件对获得的序列进行遗传进化分析。结果显示，猪流产胎儿样品中PCV3阳性率为24.4%（166/680），其中2015—2017年阳性率分别为18.2%（26/143）、22.7%（54/238）和28.8%（86/299）。从PCV3阳性样本中获得了1株PCV3基因组全长序列，命名为PCV3/CN/Hunan-57（GenBank序列登录号为MZ934695），与国内外毒株基因组序列相比，相似性为97.8%～99.2%；获得了5株PCV3 ORF2基因序列，它们的核苷酸和氨基酸相似性为97.5%～98.3%和96.7%～99.7%，与国内外参考毒株ORF2基因序列相比，其核苷酸和氨基酸相似性为96.3%～99.2%和96.8%～100%。基于ORF2基因序列构建遗传进化树和进行多重序列比对，发现获得的PCV3阳性序列分别属于PCV3a（1株）和PCV3c（4株），并鉴定出T100A、G113S和A184S突变位点。研究表明猪流产胎儿中PCV3感染率较高，且存在不同类型的PCV3毒株感染，为后续深入研究PCV3遗传变异及其相关致病性提供了重要参考信息。

语种： 中文

作者： Ning, Yujun;Wei, Lin;Lin, Shen;Jiang, Yifan;Wang, Naidong;...

期刊： 中国化学快报：英文版,2022年33(10):4710-4714 ISSN：1001-8417

通讯作者： Naidong Wang<&wdkj&>Lehui Xiao

作者机构： [Ning, Yujun] Zhengzhou Univ, Coll Chem, Zhengzhou 450001, Peoples R China.;[Ning, Yujun; Xiao, Lehui; Lin, Shen] Nankai Univ, Coll Chem, State Key Lab Med Chem Biol, Tianjin Key Lab Biosensing & Mol Recognit, Tianjin 300071, Peoples R China.;[Wei, Lin] Hunan Normal Univ, Coll Chem & Chem Engn, Changsha 410081, Peoples R China.;[Wang, Naidong; Jiang, Yifan] Hunan Agr Univ, Coll Vet Med, Changsha 410128, Peoples R China.;[Jiang, Yifan] Henan Normal Univ, Sch Chem & Chem Engn, Xinxiang 453007, Henan, Peoples R China.

通讯机构： [Naidong Wang] C;[Lehui Xiao] S;College of Veterinary Medicine, Hunan Agricultural University, Changsha 410128, China<&wdkj&>State Key Laboratory of Medicinal Chemical Biology, Tianjin Key Laboratory of Biosensing and Molecular Recognition, College of Chemistry, Nankai University, Tianjin 300071, China

关键词： Upconversion nanoparticles;Viral capsid proteins;Single-particle tracking;Hepatoma cells;Endocytosis

摘要： Real-time exploring the cellular endocytic pathway of viral capsid proteins (VCPs) functionalized nanocargos at the single-particle level can provide deep insight into the kinetic information involved in virus infection. In this work, porcine circovirus type 2 (PCV2) VCPs with different functions are modified onto the surface of upconversion nanoparticles (VCPs-UCNPs) to investigate the cellular internalization process in real-time. Clathrin-mediated endocytosis is found to be the essential uptake mechanism for these VCPs-UCNPs. Besides, it is verified that P-1-UCNPs (PCV2 VCPs with nuclear localization signal, namely P-1) can be easily assembled close to the perinuclear area, which is different from that of P-2-UCNPs (PCV2 VCPs without nuclear localization signal, namely P-2). Interestingly, multistep entry processes are observed. Particularly, confined diffusion is observed during the transmembrane process. The intracellular transport of VCPs-UCNPs is dependent on microtubules toward the cell interior. During this process, P-1-UCNPs display increased velocities with active transport, while diffusion much faster around the perinuclear area. But for P-2-UCNPs, there are only two phases involved in their endocytosis process. This study presents distinct dynamic mechanisms for the nanocargos with different functions, which would make a useful contribution to the development of robust drug delivery systems. (C) 2022 Published by Elsevier B.V. on behalf of Chinese Chemical Society and Institute of Materia Medica, Chinese Academy of Medical Sciences.

语种： 英文

作者： 孟金柱;伍春亚;潘春威;安清明;吴震洋;...

期刊： 西北农林科技大学学报(自然科学版),2022年50(03):1-9 ISSN：1671-9387

作者机构： [孟金柱] 铜仁学院贵州省梵净山地区生物多样性保护与利用重点实验室,贵州铜仁554300;[孟金柱] 湖南农业大学动物医学院,湖南长沙410128;[安清明; 潘春威; 吴震洋; 伍春亚; 赵园园] 铜仁学院

关键词： 牛;差异表达基因;膜细胞;小黄体细胞;黄体化

摘要： 【目的】探究牛卵巢小黄体细胞(SLCs)和膜细胞(TCs)中的差异表达基因,进而筛选与TCs黄体化密切相关的基因,为深入研究SLCs、TCs特异性及TCs向SLCs分化的机制提供参考。【方法】利用R软件limma包中的DESeq2,筛选GEO芯片数据库GSE83524数据集TCs和SLCs中的差异表达基因,再用goseq软件对筛选出的差异表达基因进行GO功能富集分析,用kobas软件进行KEGG信号通路分析,使用String结合Cytoscape软件进行PPI网络互作分析。采集思南黄牛颗粒细胞(GCs)和TCs,以RPLP0作为内参基因,用荧光定量PCR法对筛选出的与TCs增殖及黄体化相关的基因进行验证。【结果】共筛选获得237个差异表达基因,其中表达上调的基因115个,表达下调的基因122个。GO功能分析结果显示,参与生物学过程的有147个基因,占差异表达基因总数的53.6%,分别富集于30个组;参与细胞组分的有125个基因,占差异表达基因总数的21.4%,分别富集于12个组;参与分子功能的有98个基因,占差异表达基因总数的25.0%,分别富集于14个组。KEGG分析共发现17条通路,其中可能与卵泡内膜细胞黄体化相关的通路为FSHR、PLA2G4A、CYP19A1、CYP17A1等4个基因参与的卵巢类固醇生成通路。经过PPI网络互作分析,筛选出了前10位的hub基因。荧光定量PCR分析结果显示,FSHR、PLA2G4A、CYP19A1、CYP17A1、BUB1B和KIF20A在SLCs和TCs中的转录水平与GEO芯片数据结果一致,表现为FSHR、CYP19A1和CYP17A1在TCs中的表达量极显著高于其在SLCs中的表达量(P<0.01),PLA2G4A、BUB1B和KIF20A在TCs中的表达量亦显著高于其在SLCs中的表达量(P<0.05)。【结论】差异表达基因FSHR、PLA2G4A、CYP19A1、CYP17A1、BUB1B和KIF20A在牛优势卵泡TCs增殖分化形成黄体的过程中发挥关键作用。

语种： 中文

作者： 张虹亮;包俐;吴夏梦;李沐馨;张灿;...

期刊： 中国兽医科学,2022年52(1):111-119 ISSN：1673-4696

作者机构： [张虹亮; 包俐; 雷磊; 王水莲; 李沐馨; 王英; 吴夏梦] 湖南农业大学动物医学院;[张灿] 湖南省汉寿县沧港镇农业和农村经营管理服务站

关键词： 猪;卵泡颗粒细胞;凋亡

摘要： 为了研究胞质视黄酸结合蛋白2(cytoplasmretinoic acid binding proteins 2,Crabp2)对猪卵泡发育的调控作用及机制,笔者通过构建猪Crabp2过表达载体并设计Crabp2 siRNA干扰片段,揭示它们对猪卵泡颗粒细胞凋亡的影响。通过从屠宰场回收猪卵巢,应用TRIzol法提取组织总RNA,并反转录成cDNA。设计Crabp2基因全长引物,利用PCR克隆Crabp2基因,构建Crabp2过表达载体。同时,设计并筛选出干扰效率最高的Crabp2 siRNA。将Crabp2过表达载体和siRNA片段分别转染至猪卵泡颗粒细胞中24 h,利用实时荧光定量PCR(qRT- PCR)和蛋白质免疫印迹(Western- blot)检测颗粒细胞Crabp2的表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡率的变化,同时检测线粒体凋亡通路和死亡受体凋亡通路相关基因Bcl- 2、Bax、Caspase- 3、Fas及FasL的表达变化。对照组为转染pcDNA 3.1(+)空载体和siRNA阴性对照(NC)片段的卵泡颗粒细胞。结果显示,Crabp2过表达载体转染猪卵泡颗粒细胞可使细胞Crabp2的表达极显著升高(P<0.01),同时显著降低细胞凋亡率(P<0.05),而细胞凋亡通路中抑凋亡基因Bcl- 2的表达显著升高(P<0.05),促凋亡基因Bax、Caspase- 3、Fas极显著降低(P<0.01),FasL显著降低(P<0.05)。与此相反,Crabp2 siRNA片段转染猪卵泡颗粒细胞可使细胞Crabp2的表达极显著降低(P<0.01),同时显著增加细胞凋亡率(P<0.05),而Bcl- 2的表达显著降低(P<0.05),Bax、Caspase- 3和FasL极显著升高(P<0.01),Fas显著升高(P<0.05)。结果表明,Crabp2可能通过抑制Fas/FasL介导的死亡受体凋亡通路和线粒体凋亡通路,进而抑制猪卵泡颗粒细胞凋亡,从而参与调控猪卵泡的发育。

语种： 中文

作者： 贺峻琳;龚腾芳;谢馨锐;李文超;陈叔玉;...

期刊： 中国预防兽医学报,2022年44(4):445-448,460 ISSN：1008-0589

作者机构： [陈叔玉; 李芬; 龚腾芳; 谢馨锐; 李文超; 刘伟; 贺峻琳] 湖南农业大学动物医学院

关键词： 猬迭宫绦虫;不同宿主;线粒体DNA;序列分析;种系发育关系

摘要： 为了分析不同宿主猬迭宫绦虫的遗传多样性和种系发育关系，本研究通过PCR方法扩增了湖南省7种不同宿主体内采集的7株猬迭宫绦虫（其中3株为裂头蚴）的线粒体pcox1、pcox3和prrn S基因并测序，采用DNAStar 5.0软件分析其与其他绦虫相应基因序列的同源性；利用DnaSP V6.12软件计算并分析各基因序列的多样性；利用邻接法绘制pcox1、pcox3和prrn S基因的遗传进化树。PCR扩增及测序结果显示，7株虫株均扩增出了分别为396 bp（pcox1）、362 bp（pcox3）和280 bp（prrn S）的目的片段，且3种基因碱基差异率分别为0～2.27%、0～1.10%和0～1.79%。同源性分析结果显示，本研究的7株猬迭宫绦虫与已报道的其他猬迭宫绦虫线粒体pcox1、pcox3和prrn S基因序列的同源性分别为97.20%～100.00%、98.90%～100.00%和97.90%～100.00%；与其他绦虫线粒体pcox1、pcox3和prrn S基因序列同源性分别为66.70%～84.10%、51.70%～72.10%和63.80%～87.10%。基于基因序列单倍型数（H）、单倍型多样性（Hd）、核苷酸多样性（Pi）、平均核苷酸差异（K）数据的基因序列多样性分析结果显示，3个基因变异率为pcox1＞prrn S＞pcox3。系统进化树结果显示，7株虫株的pcox1、pcox3和prrn S基因均与已知猬迭宫绦虫相应基因聚类在同一分支，与其他绦虫所属分支相距较远，且基于pcox1、pcox3和prrn S基因均可以将猬迭宫绦虫聚为两个分支。上述结果表明，上述3种基因尤其是pcox3基因均可以作为研究不同宿主来源猬迭宫绦虫遗传变异的分子标记及用于其虫种的鉴定，且猬迭宫绦虫的遗传变异与宿主无关。该研究是国内首次通过线粒体基因探究不同宿主猬迭宫绦虫的遗传进化关系，为猬迭宫绦虫的分子鉴定、分类和群体遗传研究奠定了基础。

语种： 中文

作者： 熊梦霞;廖华媛;郑金;何景锋;曹锟;...

期刊： 微生物学通报,2022年49(2):505-513 ISSN：0253-2654

作者机构： [熊梦霞; 何景锋; 余兴龙; 曹锟; 廖华媛] 湖南农业大学动物医学院;[郑金] 湖南康保特生物科技有限公司

关键词： 碱性磷酸酶;筛选;解淀粉芽孢杆菌;酶学性质

摘要： 【背景】碱性磷酸酶作为工具酶被广泛应用于各个领域,在免疫学检测方面应用较多的是PhoA家族的碱性磷酸酶,尚无关于PhoD家族的碱性磷酸酶在免疫学检测方面的研究。【目的】筛选出一株产高酶活性PhoD家族碱性磷酸酶的细菌,并将其phoD基因进行克隆表达,研究PhoD的酶学性质,为PhoD家族的碱性磷酸酶在免疫学检测方面的应用奠定一定的基础。【方法】采取有机质丰富的土样在有机磷平板中进行细菌分离,以4-硝基苯磷酸二钠盐(4-nitrophenyl phosphate disodium salt hexahydrate,p-NPP)为底物测定有机磷平板中单菌落的酶活性,选取酶活性高的菌株作为目的菌株,克隆其phoD基因。【结果】筛选到一株产碱性磷酸酶酶活性高的菌株S2-4,通过16S rRNA基因序列同源性比较分析,鉴定该菌株为解淀粉芽孢杆菌,克隆了其phoD基因并进行诱导表达。研究了纯化后PhoD的酶学性质,PhoD的最适反应温度为70 °C;最适反应pH为9.8;PhoD最适Ca~(2+)浓度为3 mmol/L,Mg~(2+)对PhoD的酶活性有抑制作用,K~+、Zn~(2+)、Mn~(2+)和Fe~(2+)对PhoD的酶活性没有明显影响;以p-NPP为底物,在25 °C下测得PhoD的Km为5.94 mmol/L,V_(max)为31.46 μmol/(L·min),kcat值为103.59 s~(-1),为大肠杆菌碱性磷酸酶EAP kcat值的1.60倍。【结论】菌株S2-4能产高酶活性的碱性磷酸酶,其含有的PhoD为单体酶,催化效率高于EAP,是比EAP具有更大优势的标记酶。

语种： 中文

作者： 刘梦婷;吴聪明;彭旋;曾建国

期刊： 湖南农业大学学报(自然科学版),2022年48(3):326-334 ISSN：1007-1032

作者机构： 中兽药湖南省重点实验室;湖南农业大学动物医学院;中国农业大学动物医学院;国家兽药残留基准实验室;[彭旋] 湖南美可达生物资源股份有限公司

关键词： 猪;结肠炎;博落回散;博落回提取物;血根碱;白屈菜红碱;耐受性;生长性能;血液学指标;血清生化指标;组织病理学;网络药理学

摘要： 将健康的50头长大白杂交猪均分为5组,试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组分别按每千克饲料添加博落回散30、 150、300、600 mg混饲给药,相当于推荐临床剂量的1、5、10、20倍,对照组(CK)饲料中不添加博落回散,连续饲喂60 d,研究不同剂量博落回散对猪的生长性能、血液学指标、血清生化指标及组织病理学的影响,基于网络药理学探讨博落回提取物(MCE)抗结肠炎的潜在机制。结果表明,与CK相比,饲料中添加30 mg/kg的博落回散可显著提高试验猪的平均日增质量,显著降低料肉比,其他所用剂量的博落回散对试验猪的生长性能均无显著影响;饲料中添加30~600 mg/kg的博落回散的试验猪血液学和血清生化指标均无显著变化,且各脏器组织未见异常病理性损害。可见,饲料中添加30~600 mg/kg博落回散连续饲喂60 d,试验猪具有较好的耐受性。通过SwissTargetPrediction、Genecards、STRING等工具和数据库初步揭示了MCE可能是通过作用于ESR1、 BCL2L1、MTOR、MCL1、PTGS2、MAPK8、MMP9、MAPK1、ERBB2和PIK3CA等靶点,并通过ErbB和TNF等信号途径发挥抗炎作用的。

语种： 中文

作者： 宋云云;孟江海;刘丹;曹斌;赵越雯;...

期刊： 湖南农业大学学报(自然科学版),2022年48(2):215-221 ISSN：1007-1032

作者机构： 湖南农业大学动物医学院,湖南 长沙 410128;湖南省兽药工程中心,湖南 长沙 410311;[田燕涛; 孟江海; 陈韬; 宋云云; 刘丹; 赵越雯; 曹斌] 湖南农业大学动物医学院<&wdkj&>湖南省兽药工程中心

关键词： 胰腺再生蛋白Ⅲγ(RegⅢγ);金黄色葡萄球菌;肽聚糖(PG);核转录因子κB(NF–κB);丝裂原活化蛋白激酶(MAPK);猪小肠上皮细胞(IPEC–J2)

摘要： 选取不同浓度(0、10~4、10~5、10~6、10~7、10~8、10~9 cfu/mL)的灭活金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和不同质量浓度(0.0、0.1、1.0、10.0 μg/mL)的肽聚糖(PG)诱导猪小肠上皮细胞(IPEC-J2),通过qPCR和免疫印迹试验,检测RegⅢγ mRNA和蛋白的表达水平,分析RegⅢγ及P65、P38、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)等的表达变化,进一步探究RegⅢγ表达调控的分子机理。结果表明:灭活S.aureus和PG对IPEC-J2的细胞活力均有抑制作用;与不添加灭活S.aureus处理相比,添加灭活S.aureus可增加RegⅢγ mRNA和蛋白的表达,且呈现剂量依赖性,当灭活S.aureus浓度达到10~9 cfu/mL时,RegⅢγ mRNA和蛋白的表达水平极显著增加;同样PG也能诱导RegⅢγ蛋白的表达,与不添加PG的处理相比,添加1.0 μg/mL PG时,RegⅢγ mRNA和蛋白表达水平极显著升高;与不添加灭活S.aureus或PG的处理相比,添加10~9 cfu/mL灭活S.aureus或1.0 μg/mL PG能显著或极显著提高IPEC-J2的P65、P38、JNK、ERK等蛋白的表达水平,表明RegⅢγ在IPEC-J2中的表达可能是由髓样分化初级应答蛋白(MyD88)下游的核转录因子κB(NF-κB)和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK) 2条信号通路途径所调控。

语种： 中文

作者： 吴丽梅;许文博;黄复深

期刊： 湖南农业大学学报(自然科学版),2021年47(3):332-337 ISSN：1007-1032

作者机构： 湖南农业大学动物医学院,湖南长沙 410128;[吴丽梅; 许文博; 黄复深] 湖南农业大学

关键词： 多杀性巴氏杆菌;细胞分裂;蛋白;基因;操纵子;生物信息学分析

摘要： 为探讨多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)细胞分裂的分子机制,从GenBank下载不同宿主不同血清型Pm的全基因组,利用生物信息学在线分析方法筛选与Pm细胞分裂相关蛋白的编码基因,并鉴定含minC的操纵子.结果表明:发现33个与Pm细胞分裂相关蛋白的编码基因,其中14个为不同菌株的共有基因;未发现调节ftsZ聚合的Noc系统相关蛋白基因和min系统的minD和minE蛋白基因;发现1个由minC基因、脱氧核糖核酸酶基因(denⅤ)及1个未知功能的基因组成的操纵子;进一步分析发现,多个与denⅤ编码的脱氧核糖核酸酶denⅤ的相互作用蛋白具有与细胞分裂有关的结构域;Pm不同血清型菌株的生长曲线无明显差异.可见,Pm的细胞分裂是个多分子参与的过程,同时ftsZ聚合机制存在与其他细菌不同的特异性机制,denⅤ可能参与了Pm的细胞分裂.

语种： 中文

作者： 汤亚茹;阳美霞;贾金美;张虹亮;王水莲

期刊： 畜牧兽医学报,2021年52(10):2969-2977 ISSN：0366-6964

作者机构： [汤亚茹; 阳美霞; 贾金美; 张虹亮; 王水莲] 湖南农业大学动物医学院

关键词： 载体构建;间质细胞;细胞凋亡;睾酮;睾酮合成酶

摘要： 本试验通过构建GnIH过表达载体,探究其对小鼠睾丸间质细胞（TM3细胞系）的凋亡效应及睾酮合成的调节作用。从6～8周雄性小鼠睾丸组织中提取RNA,反转录获得cDNA样本,利用PCR扩增并纯化GnIH基因,应用T4连接酶将其连入PLVX-IRES-ZsGreen1载体,进一步转化到感受态菌中,通过PCR、双酶切及测序鉴定后提取质粒。随后将构建好的重组质粒转染TM3细胞系72 h,分为空质粒组和GnIH过表达组,通过显微镜观察细胞荧光、实时荧光定量PCR （qRT-PCR）法、ELISA法和流式细胞术检测GnIH表达水平、细胞凋亡率及相关凋亡基因表达变化、睾酮分泌水平和睾酮合成酶基因表达水平。结果显示,GnIH扩增片段序列与参考序列一致,将GnIH过表达质粒转染至TM3细胞系72 h后,可见高强度绿色荧光,过表达组中GnIH基因水平极显著升高（P＜0.01）,表明GnIH过表达载体构建成功且在TM3细胞系中高表达。转染72 h后,与空质粒组相比,过表达组中细胞凋亡率极显著升高（P＜0.01）,凋亡基因P53和Bax/Bcl-2表达量比值也极显著升高（P＜0.01）。与空质粒组相比,过表达组中睾酮浓度极显著降低（P＜0.01）。与此同时,睾酮合成相关酶基因P450 scc mRNA表达量极显著降低（P＜0.01）,StAR、3β-HSD和P450c17 mRNA表达量显著降低（P＜0.05）,17β-HSD mRNA表达量在两组间无显著性差异（P＞0.05）。综上所述,在体外培养的TM3细胞中过表达GnIH能诱导TM3细胞凋亡、抑制睾酮分泌且降低睾酮合成相关酶的基因表达水平,推断GnIH在小鼠睾丸间质细胞生长和睾酮合成过程中发挥负调控作用。本研究可为揭示GnIH在雄性哺乳动物生殖调控过程中的作用提供科学理论依据。

语种： 中文

作者： 刘雨珂;徐倩倩;孙佩芳;陈美伊;刘铭峰;...

期刊： 畜牧兽医学报,2021年52(04):1103-1114 ISSN：0366-6964

作者机构： 湖南农业大学动物医学院,长沙410128;[段德勇; 孙佩芳; 刘铭峰; 陈美伊; 刘雨珂; 徐倩倩] 湖南农业大学

关键词： 正常发情期;子宫蓄脓;犬子宫和卵巢;组织结构;乳铁蛋白表达

摘要： 本研究旨在探明犬子宫和卵巢在正常发情期与患子宫蓄脓时,其组织结构及乳铁蛋白（lactoferrin, LF）表达的变化特征。应用Masson’s、VVG、PAS组织化学染色方法观察乏情期、发情期、患子宫蓄脓时犬子宫及卵巢的组织结构特点,用免疫组织化学SP法观察LF的分布特征。结果显示,正常发情期犬:乏情期、发情期子宫内膜肌层厚度比分别为0.762 0、0.924 3;乏情期子宫固有层中胶原纤维含量大于发情期,发情期卵巢中胶原纤维含量大于乏情期;子宫血管层及卵巢血管内弹性膜清晰完整;子宫腺在乏情期时浅层管腔小,深层较大、腺管上皮为单层柱状上皮、上皮细胞及管腔内PAS阳性反应较强,发情期子宫腺管腔变大、腺管上皮为单层立方上皮、上皮细胞及管腔内有PAS阳性反应;子宫黏膜上皮在乏情期和发情期均为单层柱状上皮,但胞核位置不同,乏情期胞核位于中央,发情期胞核位于顶部。患子宫蓄脓犬:子宫内膜肌层厚度比为1.615 0;子宫固有层和卵巢中胶原纤维含量少于正常发情期;子宫腺管腔大,且形状不规则,管腔内有炎性细胞浸润,腺管上皮为单层立方上皮,有淋巴细胞位于基膜,上皮细胞及管腔内PAS阳性反应较弱;子宫血管层及卵巢血管内弹性膜较正常发情期变薄,且有断裂现象;子宫黏膜上皮为单层柱状上皮,胞核位于基底。LF在乏情期子宫腺上皮和卵巢中的表达水平高于发情期,而在子宫黏膜上皮中发情期的表达水平高于乏情期。患子宫蓄脓时犬子宫和卵巢中LF的表达水平均较低。综上表明,犬正常发情期与患子宫蓄脓时的子宫和卵巢组织结构特点显著不同,LF的表达水平也存在差异。

语种： 中文

作者： 彭才望;宋世圣;谢烨林;贺喜;许道军;...

期刊： 河南农业大学学报,2021年55(4):689-697,714 ISSN：1000-2340

作者机构： [孙松林; 彭才望; 宋世圣; 谢烨林] 湖南农业大学机电工程学院;[贺喜] 湖南农业大学动物科学技术学院;[许道军] 湖南农业大学动物医学院

关键词： 黑水虻虫沙;螺旋;双向集料;离散元;响应曲面

摘要： 针对黑水虻虫沙机械化集料程度低的问题,结合黑水虻养殖特点与虫沙特性,设计一种螺旋式双向集料装置。阐述了该装置的结构组成与工作原理,对其关键部件双向螺旋进行了分析与参数设计。采用离散元软件建立了虫沙-双向螺旋装置的耦合仿真模型,模拟仿真了虫沙的集料输送过程,以螺距、螺旋轴径、螺旋转速、移动速度为试验因素,以质量流率为评价指标进行了四元二次回归通用旋转组合仿真试验。试验结果表明,各因素对质量流率影响主次顺序为螺旋转速>螺旋移动速度>螺旋轴径>螺距。以提高质量流率为目标,运用Design- Expert8.0.6软件进行参数优化,确定了最优组合:螺距153 mm、螺旋轴径29 mm、螺旋转速83 r·min~(-1)、螺旋移动速度66 mm·s~(-1),此时仿真优化得到集料质量流率为1.13 kg·s~(-1),加工物理样机并进行验证试验,得到集料质量流率为1.20 kg·s~(-1),与仿真试验相对误差为5.83%。

语种： 中文

作者： 李鑫;张琳玉;王湘林;刘翔燕;李晓文;...

期刊： 中国实验动物学报,2021年29(04):490-498 ISSN：1005-4847

作者机构： [李鑫; 王吉; 李晓文; 张琳玉; 王湘林; 刘翔燕] 湖南农业大学动物医学院畜禽保健湖南省工程研究中心;湖南畜禽安全生产协同创新中心;湖南农业大学东方科技学院;[周迎芳] 湖南农业大学动物医学院畜禽保健湖南省工程研究中心<&wdkj&>湖南农业大学东方科技学院;[文利新] 湖南农业大学动物医学院畜禽保健湖南省工程研究中心<&wdkj&>湖南畜禽安全生产协同创新中心

关键词： 饲料模型;膳食脂肪;生理生化;低脂饮食;推荐油脂摄入水平

摘要： 目的探究不同饲料模型下不同油脂对小鼠生理生化指标的差异,为动物模型饲料油脂的选择、评价以及人类健康用油提供实验依据。方法以120只C57BL/6J雄性小鼠为研究对象,根据油脂供能设置两个水平,20%(低油脂供能水平)、30%(高油脂供能水平,推荐日常膳食脂肪供能比例不宜超过30%),每个油脂供能水平下分别选用猪油(LA)、菜籽油(RA)、橄榄油(OL)和猪油与菜籽油的调和油(质量比1 ∶ 1)(BO)。饲养16周后分析其对小鼠生长性能、脂肪沉积、血清生化指标以及血糖的影响。结果在低油脂供能水平下OL组小鼠的末体重极显著降低,肾周脂肪、附睾脂肪的积累极显著减少(P < 0.01),并且其Lee's指数也最低。在高油脂供能水平下,OL组、RA组小鼠的体重、肾周脂肪和附睾脂肪的积累极显著的减少(P < 0.01)。两种油脂供能水平下OL组都极显著上升了肝指数(P < 0.01),在低油脂供能水平下,RA显著增加了肾指数(P < 0.05),在高油脂供能水平下LA、RA组都极显著上升了肾指数(P < 0.01)。在高油脂供能水平下,RA组血清TC含量显著低于其它组(P < 0.05),OL组TG含量最低,从HDL-C/LDL-C比值来看,在低油脂供能水平下RA组HDL-C/LDL-C比值显著高于其它三组(P < 0.05),在高油脂供能水平下与OL组无差异(P > 0.05)。从GTT、ITT实验来看,在低油脂供能水平下BO、OL对血糖稳态调控较好,在高油脂供能水平下四组无差异(P > 0.05)。虽然BO组末血糖略有上升但总体血糖值较低,均未造成血糖调控紊乱。结论在高油脂供能水平下猪油与猪油菜籽油1 ∶ 1调和油会增加小鼠体重和脂肪沉积,在两种油脂供能水平下,橄榄油减少体重,减少了脂肪沉积,但可能对肝功能产生不利影响,菜籽油对血脂的改善最好,但其增加了肾指数,四种油脂均未造成小鼠血糖调控能力受损。

语种： 中文

作者： 唐清秀;王宜平;叶正钦;李丕顺;纪春晓

期刊： 中国兽医科学,2021年51(02):226-233 ISSN：1673-4696

作者机构： [叶正钦; 唐清秀; 王宜平] 湖南农业大学动物医学院;湖南省兽药工程技术研究中心;[纪春晓; 李丕顺] 湖南农业大学动物医学院<&wdkj&>湖南省兽药工程技术研究中心

关键词： 马立克病病毒;转导蛋白;UL49基因;免疫逃避

摘要： 马立克病病毒（MDV）感染鸡可导致外周神经、性腺、虹膜、各种内脏器官肿瘤和免疫抑制。VP22蛋白是α-疱疹病毒被膜蛋白特有的成分,它具有独特的蛋白转运能力,能够将与病毒复制有关的蛋白质以及核酸等物质转运到细胞中,并且能够通过抑制cGAS-STING信号通路来帮助病毒逃避宿主的天然免疫屏障,但是VP22是否与MDV的免疫逃逸有关还未见相关报道,仍有待进一步研究。本文主要从VP22的细胞核定位、蛋白转导以及免疫逃避等方面进行综述,加深对MDV病毒蛋白VP22的认识。

语种： 中文

作者： 麦金辉;王东亮;谭磊;王乃东

期刊： 中国兽医科学,2021年51(03):361-367 ISSN：1673-4696

作者机构： 湖南农业大学动物医学院, 湖南, 长沙, 410128;兽用蛋白质工程疫苗湖南省重点实验室, 兽用蛋白质工程疫苗湖南省重点实验室, 湖南, 长沙, 410128;兽用疫苗逆向创制湖南省工程研究中心, 兽用疫苗逆向创制湖南省工程研究中心, 湖南, 长沙, 410128;[王东亮; 麦金辉; 谭磊; 王乃东] 湖南农业大学动物医学院<&wdkj&>兽用蛋白质工程疫苗湖南省重点实验室<&wdkj&>兽用疫苗逆向创制湖南省工程研究中心

关键词： 猪细小病毒7型;病原学;流行病学;混合感染

摘要： 猪细小病毒（PPV）是引起母猪繁殖障碍的常见重要病原体之一,且存在众多基因型,对养猪业造成严重损失。2016年在美国首次发现新型猪细小病毒PPV7,随后该病毒陆续在中国、波兰、韩国、瑞典和巴西等国家被检出,并在我国多个地区广泛流行。本文综述了PPV7在病原学和流行病学等方面的研究进展,同时结合本课题组的生物信息学分析对PPV7基因组遗传多样性进行阐述与分析,以更加全面地了解PPV7的分子结构和潜在致病性,为PPV7的深入研究和防治提供科学有效的参考。

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