水稻OsFAH基因启动子的克隆及表达分析
作者：
胡超;陈彦成;任春梅;张学文;黄丽华
期刊：
湖南农业大学学报(自然科学版) ,2020年46(5):527-532 ISSN：1007-1032
作者机构：
湖南农业大学生物科学技术学院, 湖南, 长沙, 410128;农业部长江中下游籼稻遗传育种重点实验室, 农业部长江中下游籼稻遗传育种重点实验室, 湖南, 长沙, 410125;湖南省水稻研究所, 湖南, 长沙, 410125;[任春梅; 黄丽华; 张学文; 胡超] 湖南农业大学;[陈彦成] 湖南省水稻研究所
关键词：
水稻;拟南芥;延胡索酰乙酰乙酸水解酶(FAH);酪氨酸降解途径;启动子;OsFAH基因;GUS表达
摘要：
以湘晚籼13号为材料,克隆了水稻OsFAH基因启动子,构建了OsFAH启动子与GUS基因融合表达载体,并转化拟南芥。序列分析结果表明,该启动子包含了启动子核心序列TATA–box和CAAT–box以及光响应元件等。GUS染色结果表明:在拟南芥幼嫩的子叶、下胚轴和真叶中,GUS的表达较强;随着叶片的衰老,GUS表达减弱;在根中,GUS主要在主根的维管柱内表达;黑暗处理会使GUS表达减弱;在黑暗条件下,OsFAH基因表达下调。
语种：
中文
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In vitro synergistic effects of three enzymes from Bacillus subtilis CH-1 on keratin decomposition
作者：
Chen, Jinjun* ;Yang, Shengmei;Liang, Shuang;Lu, Fangjia;Long, Keren;...
期刊：
3 BIOTECH ,2020年10(4):159 ISSN：2190-572X
通讯作者：
Chen, Jinjun
作者机构：
[Chen, Jinjun; Liang, Shuang; Yang, Shengmei; Zhang, Xuewen; Long, Keren] Hunan Agr Univ, Coll Biosci & Biotechnol, Changsha 410128, Peoples R China.;[Lu, Fangjia] Purdue Univ, Coll Vet Med, Dept Comparat Pathobiol, W Lafayette, IN 47906 USA.
通讯机构：
[Chen, Jinjun] H;Hunan Agr Univ, Coll Biosci & Biotechnol, Changsha 410128, Peoples R China.
关键词：
Extracellular protease Vpr;Feather degradation;Gamma-glutamyltranspeptidase;Glyoxal/methylglyoxal reductase;Secretory enzyme;Synergistic effect
摘要：
Extracellular protease Vpr (Vpr), gamma-glutamyltranspeptidase (GGT; EC 2.3.2.2) and glyoxal/methylglyoxal reductase (YvgN; EC 1.1.1.21) are extracellular enzymes involved in feather degradation, which were identified by secretome analyses from an efficient feather-degrading strain Bacillus subtilis CH-1. The encoding sequences corresponding to the three secretory enzymes were cloned into vector pET22b for recombinant expression in Escherichia coli strain BL21 (DE3). Afterward, the proteins containing the C-terminal His-tag were purified using a Ni-IDA column. The optimal temperatures and pH values for protease activity of recombinant Vpr, GGT, and YvgN were identified as 45°C/pH 7.0, 40°C/pH 8.0, and 50°C/pH 6.0 respectively when casein is the substrate. Furthermore, the synergistic effects of the three enzymes were studied using feather powder as substrate. Vpr was the core enzyme to hydrolyze keratin, while GGT and YvgN were coenzymes providing reducing activities for keratin decomposition. The keratinolytic activity was enhanced to about 1.4-folds when YvgN and Vpr applied together in comparison to Vpr alone. And the keratinolytic activity almost reached to 1.5-folds when all the three enzymes were combined to use. The study provides a novel perspective of the mechanism of keratin degradation by microorganisms, and thereby may also be of relevance for the design of an industrial process for enzymatic keratin degradation; however, additional experiments must be done to substantiate this conclusion. © 2020, King Abdulaziz City for Science and Technology.
语种：
英文
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专业认知度调查及专业导论课程的改革探讨——以湖南农业大学生态学专业为例
作者：
梁运姗;孙文笑;曾洪;张学文;方俊;...
期刊：
科教文汇(下旬刊) ,2019年(24):64-67 ISSN：1672-7894
作者机构：
湖南农业大学生物科学技术学院洞庭湖区农村生态系统健康湖南省重点实验室 湖南·长沙 410128;湖南省猪场废弃物无害化处理与资源化利用工程研究中心 湖南·长沙 410128;[孙文笑; 梁运姗; 曾洪; 张学文; 邹冬生; 方俊] 湖南农业大学
关键词：
专业认知度;专业导论课程;教学改革;生态学
摘要：
专业导论课的设置能帮助学生更好地认知自己所学专业,从而协助学生制定合理的职业生涯规划。本文以湖南农业大学生态学专业的学生为调查对象,对不同年级学生的专业认知度和专业发展规划进行了分析,并对目前专业导论课程的存在问题及改革策略进行了探讨,拟为提高学生的专业认知度和改良专业导论课的教学方式提供指导。
语种：
中文
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Transcriptome analysis of three cultivars of Poria cocos reveals genes related to the biosynthesis of polysaccharides
作者：
Yang, Lan;Tang, Juan;Chen, Jin-Jun;Peng, Ai-Yun;Wang, Qi-Ming;...
期刊：
亚洲天然物产研究(英文版) ,2019年21(5):462-475 ISSN：1028-6020
通讯作者：
Peng, Guo-Ping
作者机构：
[Yang, Huan-Zhi; Rao, Li-Qun; Chen, Jin-Jun; Wang, Qi-Ming; Tang, Juan; Yang, Hua; Zhang, Chen; Zhang, Xian-Wen; Yang, Lan; Peng, Guo-Ping] Hunan Agr Univ, Coll Biosci & Biotechnol, Changsha 410128, Hunan, Peoples R China.;[Yang, Huan-Zhi; Rao, Li-Qun; Wang, Qi-Ming; Tang, Juan; Yang, Hua; Zhang, Chen; Zhang, Xian-Wen; Yang, Lan; Peng, Guo-Ping] Hunan Engn Lab Good Agr Practice & Comprehens Uti, Changsha 410128, Hunan, Peoples R China.;[Peng, Ai-Yun] Sun Yat Sen Univ, Sch Chem, Guangzhou 510275, Guangdong, Peoples R China.
通讯机构：
[Peng, Guo-Ping] H;Hunan Agr Univ, Coll Biosci & Biotechnol, Changsha 410128, Hunan, Peoples R China.
关键词：
1,3 beta glucan synthase;aldehyde dehydrogenase;alpha galactosidase;alpha glucosidase;alpha,alpha trehalose phosphate synthase;beta glucosidase;fungal enzyme;gdp levo fucose synthase;gdp mannose 4,6 dehydratase;glucan 1,3 beta glucosidase;gluconolactonase;glucose 6 phosphate dehydrogenase;glucose 6 phosphate isomerase;glycogen debranching enzyme;iditol dehydrogenase;polygalacturonase;polysaccharide;transcriptome;unclassified drug;fungal polysaccharide;transcriptome;Article;breeding;carbohydrate synthesis;cultivar;gene expression profiling;gene sequence;nonhuman;quantitative analysis;real time polymerase chain reaction;transcriptomics;validation study;Wolfiporia cocos;gene expression regulation;genetics;metabolism;Wolfiporia;Fungal Polysaccharides;Gene Expression Regulation, Fungal;Transcriptome;Wolfiporia
摘要：
Poria cocos (P. cocos) polysaccharides (PCPs) are used to improve immunity and possess antitumor activities. We compared three cultivars of P. cocos (5.78, XJ 28 and JHYH) PCP contents. Then we determined that malZ, galA, SORD, gnl and bglX are key enzymes within the PCP biosynthetic pathway by using HiSeq2500 transcriptome and qRT-PCR validation. Our results provide more detailed information about the PCP biosynthesis pathway at the molecular level in P. cocos and establish the functions for the molecular breeding to produce polysaccharides in general for therapeutic use in Chinese medicinal plants. © 2018, © 2018 Informa UK Limited, trading as Taylor & Francis Group.
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英文
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Long non-coding RNA UASR1 promotes proliferation and migration of breast cancer cells through the AKT/mTOR pathway
作者：
Cao, Zhe;Wu, Ping;Su, Min;Ling, Hongyan;Khoshaba, Ramina;...
期刊：
JOURNAL OF CANCER ,2019年10(9):2025-2034 ISSN：1837-9664
通讯作者：
Cao, Deliang;Zhang, Xuewen;Jin, Junfei
作者机构：
[Cao, Zhe; Liao, Qianjin; Su, Min; Cao, Deliang] Cent S Univ, Xiangya Sch Med, Hunan Canc Hosp, 283 Tongzipo Rd, Changsha 410013, Hunan, Peoples R China.;[Cao, Zhe; Liao, Qianjin; Su, Min; Cao, Deliang] Cent S Univ, Xiangya Sch Med, Affiliated Canc Hosp, 283 Tongzipo Rd, Changsha 410013, Hunan, Peoples R China.;[Cao, Zhe; Chen, Jinjun; Zhang, Xuewen; Gao, Han; Zhao, Yan] Hunan Agr Univ, Coll Biosci & Biotechnol, Changsha 410128, Hunan, Peoples R China.;[Huang, Chenfei; Wu, Ping; Ling, Hongyan; Cao, Deliang; Khoshaba, Ramina] Southern Illinois Univ, Dept Med Microbiol Immunol & Cell Biol, Sch Med, 913 N Rutledge St, Springfield, IL 62794 USA.;[Wu, Ping] Xiangtan Univ, Sch Chem Engn, Dept Pharmaceut Engn, Xiangtan 411105, Peoples R China.
通讯机构：
[Cao, Deliang] C;[Zhang, Xuewen] H;[Cao, Deliang] S;[Jin, Junfei] G;Cent S Univ, Xiangya Sch Med, Hunan Canc Hosp, 283 Tongzipo Rd, Changsha 410013, Hunan, Peoples R China.
关键词：
complementary DNA;DNA;long untranslated RNA;long untranslated RNA uasr1;mammalian target of rapamycin;netrin receptor;protein kinase B;rapamycin;short hairpin RNA;unc 5 netrin receptor b;unclassified drug;Akt/mTOR signaling;Article;breast cancer;cell counting;cell migration;cell proliferation;colony formation;comparative study;controlled study;DNA sequence;ectopic expression;human;human cell;intron;MCF-7 cell line;MDA-MB-231 cell line;RNA transcription;sequence analysis;upregulation;wound healing assay
摘要：
Long non-coding RNAs (lncRNAs) are non-coding RNAs longer than 200 nucleotides that function as regulatory factors in many human diseases, including cancer. However, majority of lncRNAs remain to be characterized. In this study, we characterized a novel lncRNA transcript, named UNC5B antisense RNA1 (UASR1). UASR1 is 647bp in length consisting of two exons. This lncRNA is an antisense of intron 1 of unc-5 netrin receptor B (UNC5B) gene. In breast cancer tissues, UASR1 was upregulated. Ectopic expression of UASR1 promoted proliferation and clonogenic growth of breast cancer cells MCF7 and MDA-MB-231. The migration of these cells also increased as demonstrated by wound healing and transwell assays. In contrast, silencing of UASR1 suppressed cell proliferation and migration. Further studies showed that UASR1 activated AKT and AKT-mediated mTOR signaling pathway to stimulate cell proliferation and growth. In these cells, active pAKT, pTSC2, p4EBP1 and pp70S6K were increased. Taken together, our data suggest that UASR1 plays an oncogenic role in breast cancer cells through activation of the AKT/mTOR signaling pathway, being a novel RNA oncogene. © Ivyspring International Publisher.
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英文
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Isolation of a feather-degrading strain of bacterium from spider gut and the purification and identification of its three key enzymes
作者：
Qu, Fang;Chen, Qingwang;Ding, Yiying;Liu, Zihao;Zhao, Yan;...
期刊：
Molecular Biology Reports ,2018年45(6):1681-1689 ISSN：0301-4851
通讯作者：
Chen, Jinjun
作者机构：
[Liu, Zihao; Chen, Qingwang; Chen, Jinjun; Ding, Yiying; Zhang, Xuewen; Qu, Fang; Zhao, Yan; Liu, Zikui] Hunan Agr Univ, Coll Biosci & Biotechnol, Changsha 410128, Hunan, Peoples R China.
通讯机构：
[Chen, Jinjun] H;Hunan Agr Univ, Coll Biosci & Biotechnol, Changsha 410128, Hunan, Peoples R China.
关键词：
Stenotrophomonas maltophilia;Feather degradation;Spider gut;Synergic enzymes;Symbiotic microorganism
摘要：
A novel feather-degrading bacterium named CA-1 was isolated from the gut of the spider Chilobrachys guangxiensis, which degrades native whole chicken feathers within 20 h. The CA-1 was confirmed to belong to Stenotrophomonas maltophilia based on morphologic and molecular analysis. Maximum feather degradation activity of the bacterium was observed at 37 A degrees C in basal feather medium (NaCl 0.5 g/L, KH2PO4 0.3 g/L, K2HPO4 0.4 g/L, feather powder 10.0 g/L, pH 8.0), which was inhibited when glucose and ammonium nitrate were added in the medium. Furthermore, the purified enzymes under the optimal and suppressive conditions were analyzed respectively by SDS-PAGE and LC-MS/MS. Three enzymes, namely alkaline serine protease (29.1 kDa), ABC transporter permease (27.5 kDa), and alkaline phosphatase (40.8 kDa), were isolated and identified from the supernatant of the optimal culture and were considered to play principal roles. On the other hand, the potential synergic effects of the three proteins in S. maltophilia CA-1 feather degradation system were analyzed theoretically. CA-1 may product outer-membrane vesicles comprised of membranes and periplasmic proteins in the feather medium. The newly identified CA-1 and its synergic enzymes provide a new insight into further understanding the molecular mechanism of feather degradation by microbes. They also have potential application in cost-effectively degrading feathers into feeds and fertilizers through careful optimization and engineering of the three newly identified enzymes.
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Fumarylacetoacetate hydrolase is involved in salt stress response in Arabidopsis
作者：
Huang, Lihua;Hu, Chao;Cai, Wei;Zhu, Qi;Gao, Bida;...
期刊：
Planta ,2018年248(2):499-511 ISSN：0032-0935
通讯作者：
Ren, Chunmei
作者机构：
[Ren, Chunmei; Huang, Lihua; Cai, Wei] Hunan Agr Univ, Hunan Prov Key Lab Crop Germplasm Innovat & Utili, Changsha 410128, Hunan, Peoples R China.;[Hu, Chao; Ren, Chunmei; Huang, Lihua; Zhang, Xuewen; Cai, Wei] Hunan Agr Univ, Coll Biosci & Biotechnol, Changsha 410128, Hunan, Peoples R China.;[Zhu, Qi] Hunan Agr Univ, Coll Hort & Landscape, Changsha 410128, Hunan, Peoples R China.;[Gao, Bida] Hunan Agr Univ, Coll Plant Protect, Changsha 410128, Hunan, Peoples R China.
通讯机构：
[Ren, Chunmei] H;Hunan Agr Univ, Hunan Prov Key Lab Crop Germplasm Innovat & Utili, Changsha 410128, Hunan, Peoples R China.;Hunan Agr Univ, Coll Biosci & Biotechnol, Changsha 410128, Hunan, Peoples R China.
关键词：
SHORT-DAY SENSITIVE CELL DEATH 1;Reactive oxygen species;Salt hypersensitivity;Tyr degradation pathway
摘要：
Fumarylacetoacetate hydrolase participates in positive regulation of salt stress in Arabidopsis. Fumarylacetoacetate hydrolase (FAH) catalyzes the hydrolysis of fumarylacetoacetate into fumarate and acetoacetate, the final step in the Tyr degradation pathway that is essential to animals. However, the Tyr degradation pathway is not well understood in plants. Previously, we found that mutation of the SHORT-DAY SENSITIVE CELL DEATH 1 (SSCD1) gene encoding FAH in Arabidopsis causes spontaneous cell death under short day, which first indicated that the Tyr degradation pathway also plays an important role in plants. In this study, we found that the SSCD1 gene was up-regulated by salt stress, and the sscd1 mutant was hypersensitive to salt stress. However, the double mutant of SSCD1 and HOMOGENTISATE DIOXYGENASE, in which intermediates of the Tyr degradation pathway could not be produced, displayed a normal response to salt stress. Furthermore, the sscd1 mutant showed more accumulation of reactive oxygen species (ROS) and less up-regulation of some ROS-scavenging genes such as ASCORBATE PEROXIDASE 2 and COPPER/ZINC SUPEROXIDE DISMUTASE 1 compared with wild type under salt stress. In addition, SSCD1 expression was also up-regulated by H2O2, and the sscd1 mutant exhibited hypersensitivity to oxidative stress compared with wild type. Taken together, we concluded that loss of FAH in sscd1 leads to the accumulation of Tyr degradation intermediates, which impairs the up-regulation of some ROS-scavenging genes under salt stress, causing more accumulation of ROS, resulting in the hypersensitivity of sscd1 to salt stress.
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英文
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烟草和拟南芥表皮毛中特异表达iaaM后的遗传效应
作者：
谢德雄;潘嘉立;赵燕;黄丽华;黄妤;...
期刊：
湖南农业大学学报(自然科学版) ,2018年44(3):284-289 ISSN：1007-1032
作者机构：
[谢德雄; 潘嘉立; 赵燕; 黄丽华; 黄妤; 陈金军; 张学文] 湖南农业大学生物科学技术学院, 湖南, 长沙, 410128
关键词：
烟草;拟南芥;色氨酸单加氧酶基因;表皮毛;生长素;遗传效应
摘要：
利用色氨酸单加氧酶基因iaaM与拟南芥表皮毛特异表达GL2基因启动子重组后,构建了在植物表皮毛细胞中特异表达iaaM基因的重组基因载体;采用根癌农杆菌叶盘转化法将重组基因转化到烟草WS38(对照)中,筛选和鉴定出了6株转化烟草植株;将该重组基因以根癌农杆菌花序浸渍法转至拟南芥(Colombia ecotype,对照),筛选出9株拟南芥转化植株,并对稳定转化的转基因植株表皮毛进行观察。结果表明:转基因烟草表皮毛较对照植株显著增长,其长度最长为对照的2.2倍,但转基因拟南芥表皮毛长度与对照间无显著差异。对烟草幼叶进行生长素浓度检测,转iaaM基因烟草吲哚乙酸含量显著提高,说明iaaM在烟草表皮毛细胞中表达,使其合成和积累更多的生长素;转基因拟南芥和烟草表皮毛密度均较对照显著增加,证明植物表皮毛发育模式中GL2表达的特异性受细胞内生长素的影响。
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中文
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生长素对荠菜心皮发育的影响
作者：
刘晓柱;李银凤;赵燕;张学文
期刊：
河南农业科学 ,2018年47(8):88-94 ISSN：1004-3268
作者机构：
贵州理工学院食品药品制造工程学院, 贵州, 贵阳, 550003;湖南农业大学生物科学技术学院, 湖南, 长沙, 410000;[刘晓柱; 李银凤] 贵州理工学院食品药品制造工程学院, 贵州, 贵阳, 550003;[赵燕; 张学文] 湖南农业大学生物科学技术学院, 湖南, 长沙, 410000
关键词：
荠菜;心皮;生长素;基因克隆;表达分析
摘要：
为探讨生长素对荠菜心皮发育的影响,构建了生长素报告系统DR 5∶∶GFP,通过农杆菌介导法获得了转基因荠菜植株。荧光显微镜观察结果显示,荠菜心皮发育早期上端两侧荧光信号较其他部分强。为进一步探讨其分子机制,以RT-PCR方法克隆了荠菜PIN 3基因(CbPIN 3),并做了生物信息学分析。结果表明,CbPIN 3基因编码区全长1 950 bp,可编码649个氨基酸。CbPIN3蛋白存在13个丝氨酸磷酸化位点,包含9个跨膜结构域,与拟南芥PIN3亲缘关系最近。此外,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测荠菜CbPIN 3组织表达特点,发现CbPIN 3基因在荠菜多种组织中均表达,在茎中表达量最高,果荚中表达量最低。
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黄花蒿悬浮培养细胞系的建立及遗传转化
作者：
龙炎杏;张学文;罗莎;肖楠;赵燕
期刊：
湖南农业大学学报(自然科学版) ,2018年44(6):607-612 ISSN：1007-1032
作者机构：
[龙炎杏; 张学文; 罗莎; 肖楠; 赵燕] 湖南农业大学生物科学技术学院, 湖南, 长沙, 410128
关键词：
黄花蒿;6–苄基氨基腺嘌呤;萘乙酸;二氯苯氧乙酸;悬浮细胞;农杆菌介导;遗传转化
摘要：
为建立稳定的黄花蒿悬浮细胞系,以黄花蒿428–A植株的子叶、茎、腋芽和叶片为外植体,以MS为基础培养基,采用3因素(6–BA、NAA、2,4–D)4水平的L_(16)(4~3)正交试验,优化黄花蒿愈伤组织诱导培养基,分析不同质量浓度(0、5、10、15、20、25、30 mg/L)潮霉素对黄花蒿悬浮细胞生长的影响,比较羧苄青霉素(0、100、 150、200、250、300 mg/L)对农杆菌的抑制效果,并运用农杆菌介导法对黄花蒿悬浮细胞进行GUS报告基因及色氨酸单加氧酶iaaM基因的遗传转化。结果表明:黄花蒿叶片愈伤诱导率较高,叶片愈伤组织较优培养基为MS+6–BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L,出愈率可达99.33%;潮霉素最适筛选质量浓度为30 mg/L,羧苄青霉素最适抑菌质量浓度为200 mg/L;转基因抗性愈伤GUS组织化学染色及PCR鉴定结果表明,外源基因iaaM已导入并整合至黄花蒿基因组中。
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大学生科创活动与创新创业能力培养研究——以湖南农业大学生物科学技术学院为例
作者：
陈金军;周漠;蔡淑娴;张学文
期刊：
文化创新比较研究 ,2018年2(35):93-95 ISSN：2096-4110
作者机构：
湖南农业大学生物科学技术学院,湖南长沙,410128;湖南农业大学园艺园林学院茶学系,湖南长沙,410128;[陈金军; 蔡淑娴; 张学文; 周漠] 湖南农业大学
关键词：
大学生;创新;创业;教育;培养;就业
摘要：
大学生科创活动是培养大学生创新创业能力的重要方式和手段,是极具前瞻性的举措,因此,举办科技创新创业活动对现代大学生以及国家和社会都有着重要意义。我们通过对湖南农业大学生物科学技术学院的学生进行问卷调查发现,以高校为创新创业平台存在障碍与挑战。主要原因是高校资源不够,并且宣传力度欠缺。根据调查分析,认为清除障碍、提升高校科创活动水平的策略包括加大实验室的开放度与使用度,以及重视实验教学,从而激发学生对创新创业的热情。另外,也需要加强创新创业教育的导师团队建设,整合资源,构建一体化平台。
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中文
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荠菜雌蕊调控转录因子SPT基因的克隆与拟南芥遗传转化
作者：
张莉芳;杨正修;张学文;龙炎杏;赵燕
期刊：
作物研究 ,2018年32(3):202-207 ISSN：1001-5280
作者机构：
湖南农业大学生物科学技术学院,长沙,410128;[赵燕; 张学文; 龙炎杏; 杨正修; 张莉芳] 湖南农业大学
关键词：
荠菜;SPT基因;克隆;遗传转化
摘要：
根据Gen Bank收录的拟南芥At SPT基因c DNA序列设计引物,采用同源克隆的方法从野生型荠菜（Capsella bursa-pastoris）中RT-PCR扩增出荠菜Cb SPT基因全长c DNA,通过生物信息学分析表明:荠菜Cb SPT基因c DNA序列1191 bp,其中开放阅读框1047 bp,编码348个氨基酸,与拟南芥At SPT基因的核酸序列和氨基酸序列的同源性分别达到98%和93%左右,可以判断为荠菜Cb SPT基因c DNA序列（Cb SPT）。以Ti质粒p WM101为基础,构建了由Ca MV35S启动子调控的Cb SPT基因植物表达载体p WM101-35S::Cb SPT。采用根癌农杆菌介导的浸花序法转化荠菜的同科植物拟南芥,获得了转Cb SPT基因的拟南芥植株。转基因拟南芥心皮果荚形态大小发生了一定的变化,说明荠菜Cb SPT基因在拟南芥中的组成型表达对拟南芥心皮形态和大小都产生了一定影响,但并没有使拟南芥表现出荠菜短角果的形态。
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蜘蛛多肽毒素JZTX-51和JZTX-26的重组表达和纯化
作者：
邵婕;潘娇;瞿芳;刘子昊;丁易颖;...
期刊：
生物工程学报 ,2018年34(10):1668-1678 ISSN：1000-3061
通讯作者：
Chen, J.
作者机构：
[邵婕; 潘娇; 瞿芳; 刘子昊; 丁易颖; 罗莎; 张学文; 陈金军] 湖南农业大学生物科学技术学院, 湖南, 长沙, 410128
通讯机构：
College of Bioscience and Biotechnology, Hunan Agricultural University, Changsha, Hunan, China
关键词：
蜘蛛毒素;原核表达;融合蛋白;DRG细胞;钠离子通道
摘要：
为建立一种简便、快速且能大量获得富含二硫键的蜘蛛多肽毒素JZTX-26 （35 aa）和JZTX-51 （27 aa）的有效方法,利用PCR的方法克隆成熟肽编码基因并插入至大肠杆菌Escherichia coli表达载体pMAL-p2x中与MBP（麦芽糖结合蛋白）标签融合,构建重组表达质粒pMAL-jz26和pMAL-jz51。在受体菌TB1和BL21（DE3）中对两个重组表达质粒分别进行IPTG诱导表达,通过Amylose亲和层析柱纯化并进行SDS-PAGE分析;采用因子X对融合蛋白进行酶切后通过分子筛以及反相高效液相色谱对两种重组蛋白进行纯化。通过MALDI-TOF-TOF质谱鉴定,表达产物的分子量与预期的多肽理论分子量一致。1L表达培养液中能获得大约5mg纯化的目的蛋白JZTX-26或JZTX-51。结果表明利用该原核表达体系可对蜘蛛毒素基因jztx-26和jztx-51进行融合表达,并对重组蛋白进行亲和层析,为采用基因工程的手段大量获得蜘蛛多肽毒素奠定了基础。
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双分子荧光增强法实时观察烟草BY2细胞内Ca~(2+)信号转导
作者：
翟翔;赵燕;曹哲;高晗;徐茂盛;...
期刊：
中国细胞生物学学报 ,2018年40(11):1858-1866 ISSN：1674-7666
作者机构：
[翟翔; 赵燕; 曹哲; 高晗; 徐茂盛; 黄妤; 黄丽华; 陈金军; 张学文] 湖南农业大学生物科学技术学院, 长沙, 410128
关键词：
钙离子;信号转导;实时观察
摘要：
钙离子作为第二信使是细胞信号转导的重要成员,也是细胞信号转导研究的重要对象.为了更有效地实时观察植物细胞中的钙离子信号,将响应钙离子的水母素(aequorin,AEQ)基因转化到已由绿色荧光蛋白(GFP)标记的分泌载体膜蛋白SCMP2(secretive carrier membrane proteins 2)的烟草BY2细胞(SCAMP2-GFP).经过对转化细胞的筛选和分子检测,获得了双价转化的BY2细胞株.转化细胞经腔肠素处理并实时显微观察,能较清晰地观察到细胞中钙离子响应的荧光信号,水母素单价转化细胞则几乎观察不到荧光信号,说明水母素响应钙离子并作用于腔肠素所发弱荧光能进一步激发GFP荧光,使弱荧光有效增强.尽管响应钙离子的双价自激发荧光较利用外施激发光对GFP的激发荧光稍弱,但已能满足在显微镜下直接观察和采集信号的荧光强度,实现对细胞内钙离子的实时观察.通过拍照采集钙离子响应的荧光图像,在3倍于外激发的曝光时间条件下获得清晰的荧光图片.以上结果证明了双价标记法能有效地实时观察细胞的钙离子信号.对应于Aequorin与GFP融合表达的体系,双价转化法还能利用GFP不同亚细胞内定位的特定蛋白标记,对亚细胞水平的不同部位开展钙离子信号研究,体现出其优势.
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借助科研平台开展基因工程实验课教学改革探索与实践
作者：
赵燕;黄丽华;张学文;李健
期刊：
现代农业科技 ,2017年(24):276-278 ISSN：1007-5739
作者机构：
湖南农业大学生物科学技术学院,湖南长沙,410128;[赵燕; 黄丽华; 张学文; 李健] 湖南农业大学
关键词：
科研平台;基因工程;实验课程;教学改革;成效;建议
摘要：
基因工程实验是基因工程课程教学的重要环节.本文基于对基因工程实验教学内容的整合和优化,借助科研平台优势进行基因工程实验教学改革探索与实践,分析了教学改革成效与存在的不足,并提出相应建议,以期调动学生的学习兴趣、培养学生的科研素质、提高基因工程实验课程教学质量.
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十字花科植物PIN3基因调控元件及表达分析
作者：
李玉军;赵燕;黄丽华;汤宾;黄妤;...
期刊：
中国农业大学学报 ,2017年22(7):24-33 ISSN：1007-4333
作者机构：
[李玉军; 赵燕; 黄丽华; 汤宾; 黄妤; 张学文] 湖南农业大学生物科学技术学院, 长沙, 410128
关键词：
十字花科;PIN3基因;启动子元件;基因表达
摘要：
为探明十字花科不同物种PIN3基因的表达调控差异,从拟南芥(Arabidopsis thaliala)、红花荠菜(Capsella rubella)、白菜(Brassica rapa)、油菜(Brassica napus)和甘蓝(Brassica oleracea)等17个已完成基因组测序的十字花科物种基因组数据库中鉴定出18个PIN3同源基因。对这18个同源基因编码序列上游1 500 bp启动子区域顺式作用元件进行预测及比对分析,结果发现,光响应、多种激素响应及胁迫响应等相关元件呈现出较大差异,其中生长素以及向地性响应相关元件具有较高的保守性。克隆普通荠菜PIN3同源基因(CbPIN3)并构建普通荠菜PIN3基因启动子的GUS报告系统CbPIN3 pro::GUS转化拟南芥。与拟南芥基因表达数据库比较,荠菜启动子表达与拟南芥PIN3具有基本一致的组织表达模式,但也存在一定的组织差异,说明植株形态建成中生长素极性转运调控的差异。拟南芥和荠菜PIN3的表达差异是十字花科物种适应性进化模式的缩影。
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十字花科植物17个物种PIN3基因的系统进化分析
作者：
汤宾;李玉军;赵燕;黄丽华;黄妤;...
期刊：
湖南农业大学学报(自然科学版) ,2017年43(4):366-371 ISSN：1007-1032
作者机构：
[汤宾; 李玉军; 赵燕; 黄丽华; 黄妤; 张学文] 湖南农业大学生物科学技术学院, 湖南, 长沙, 410128
关键词：
十字花科;PIN3基因;系统进化
摘要：
为了探明十字花科植物不同物种PIN3基因之间的进化差异,运用Brassica Database数据库及十字花科基因数据库在线平台,对拟南芥(Arabidopsis thaliala)、红花荠菜(Capsella rubella)、芜青(Brassica rapa)、油菜(Brassica napus)、甘蓝(Brassica oleracea)等17个已完成基因组测序的十字花科物种的18个(油菜含有2个)PIN3同源性基因进行分析,并对其推导的编码蛋白(PIN3)进行了系统进化分析。结果表明,18个PIN3序列间的相似性为86.74%,PIN3推导蛋白之间的相似度为90.93%,蛋白等电点约为7.15~9.44,芜青PIN3等电点明显偏高。 PIN3的氨基酸比对分析结果表明,在多个糖基化位点出现具有种属差异性和符合进化关系的氨基酸替换现象,盐芥属植物中条叶蓝芥(Thellugiella parvula)PIN3在更多的位点出现氨基酸的替换,这可能是导致十字花科不同种属PIN3蛋白的功能和活性出现差异的原因。
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小麦原生质体高效转化体系的建立
作者：
刘鑫;魏学宁;张学文;张增艳
期刊：
植物遗传资源学报 ,2017年18(1):117-124 ISSN：1672-1810
作者机构：
湖南农业大学生物科学技术学院, 农业部麦类生物学与遗传育种重点实验室, 长沙, 410128;中国农业科学院作物科学研究所, 农作物基因资源与基因改良国家重大科学工程;[魏学宁; 张增艳] 农业部麦类生物学与遗传育种重点实验室, 北京, 100081;湖南农业大学生物科学技术学院, 长沙, 410128;[刘鑫] 湖南农业大学生物科学技术学院, 农业部麦类生物学与遗传育种重点实验室, 长沙, 410128
关键词：
小麦原生质体;核酸酶活性;原生质体转化效率;抗病相关基因;亚细胞定位
摘要：
植物原生质体广泛应用于植物基因功能研究中,包括瞬时基因表达、亚细胞定位、蛋白互作和蛋白活性分析等。当前,小麦基因的亚细胞定位和功能分析,大多利用模式植物拟南芥等异源的原生质体,易于造成研究结果的不准确。为避免这种情况,小麦原生质体制备及高效转化体系的建立与应用是必需的。在PEG介导的小麦原生质体转化过程中,原生质体分泌的核酸酶大量降解质粒DNA,转化效率的提高因此受到阻碍。为了建立小麦原生质体的高效转化体系,本文测试了抑制胞外核酸酶活性的因素和提高质粒DNA浓度等多个条件对转化效率的影响。结果表明,转化过程中加入双倍用量的质粒DNA进行转化,且始终保持低温环境(1 ℃)用以抑制核酸酶酶活性,可以使小麦原生质体的转化效率提高至85%。本文还将该系统成功地应用于2个小麦抗病相关蛋白的亚细胞定位研究,证明了该系统的高效性和实用性。该研究对未来相关研究有一定参考价值。
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互动教学在《生物化学与分子生物学》教学中的运用技巧
作者：
周海燕;田云;方俊;张学文
期刊：
教育教学论坛 ,2017年(42):178-179 ISSN：1674-9324
作者机构：
湖南农业大学生物科学技术学院,湖南 长沙,410128;[田云; 张学文; 周海燕; 方俊] 湖南农业大学
关键词：
生物化学与分子生物学;互动教学;运用技巧
摘要：
《生物化学与分子生物学》是生命科学领域的一门重要的专业基础课,在2013级和2014级本科学生的教学中采用互动式教学法,并对这两个年级的学生进行随堂调查和期末反馈,大部分学生认为互动式课堂教学能激发学习兴趣,更好地引导学生理解本学科的相关知识点,且能够将本学科与其他相关学科互相联系,提高了自学能力和思考能力,因此互动式教学在《生物化学与分子生物学》课程中的应用是成功的。
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植物科学实验室存在的安全隐患与对策
作者：
杨华;张学文;洪彬;林元山
期刊：
教育教学论坛 ,2017年(41):271-272 ISSN：1674-9324
作者机构：
[杨华; 林元山] 湖南农业大学 生物科学技术学院,长沙 410128;[杨华; 林元山] 湖南农业大学 植物科学国家级实验教学示范中心,长沙 410128;湖南农业大学 生物科学技术学院,长沙,410128;湖南农业大学 教务处,长沙,410128;[张学文; 洪彬] 湖南农业大学
关键词：
植物科学;实验室安全;管理对策
摘要：
植物科学实验室是农业院校科研和教学的重要场所，实验室的安全对高校乃至全社会的安全稳定、和谐发展至关重要。针对分析植物科学实验室存在的安全隐患，提出了高校在实验室安全管理上的先进理念和科学管理对策。
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